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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

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虫号: 12998984

[交流] 细胞rna提取

病毒诱导细胞凋亡后，要做凋亡基因的表达，想请教在提取细胞RNA时是直接加Trizol，还是要倒掉细胞液后再加Trizol呢？倒掉细胞液的话，那漂浮的凋亡细胞不是也被弃掉了，不会影响提取的RNA的量吗？

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1楼 2019-04-23 17:22:16

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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 13104654

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如果是冷冻的需要完全解冻之后再加Trizol，通常Trizol和血清的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIOG CFRNA EASY KIT离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。