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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切体系
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四月Aprillll

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切体系 已有3人参与

想用双酶切体系（Xba1和Not1）对质粒进行切割连接，可是两个酶用的buffer不一样，一个用M Buffer，一个用H
导师说先用Not1（H buffer）切一会再加Xba1，请问怎么解决这两个酶的Buffer的问题呢？

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2019-04-23 16:57:36
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

XbaI+NotI双酶切推荐的是0.5*K+BSA啊。
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6楼2020-01-13 15:29:00
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查看全部 7 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-23 22:36:05
本帖仅楼主可见
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2楼2019-04-23 17:15:51
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细菌也疯狂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:20:32
你用的是TAKARA的酶吧，官网上有双酶切共用buffer可以查到。我也在用NotI，这个酶切效率灰常第，说多了都是泪。。。建议分步切，体系数增加，避免回收损失浓度低，祝好运！
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3楼2019-04-29 16:53:00
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眺望爱

铜虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:20:43
这个如果可以最好找那种能共用buff的酶，不同buff最好分开切，因为盐离子浓度不一样，导致酶切效率降低，特别是xbal这个酶本来就效率低，要是酶切开就搞笑了。所以要么换酶，要么切完直接过柱回收再切，可以切个两管，这样提高总体的量

发自小木虫Android客户端
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目标：生物的星辰大海！！！！
4楼2019-05-30 17:00:44
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查看全部 7 个回答
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