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四月Aprillll

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切体系已有3人参与

想用双酶切体系(Xba1和Not1)对质粒进行切割连接,可是两个酶用的buffer不一样,一个用M Buffer,一个用H
导师说先用Not1(H buffer)切一会再加Xba1,请问怎么解决这两个酶的Buffer的问题呢?

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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匿名

用户注销 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-23 22:36:05
本帖仅楼主可见
2楼2019-04-23 17:15:51
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细菌也疯狂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:20:32
你用的是TAKARA的酶吧,官网上有双酶切共用buffer可以查到。我也在用NotI,这个酶切效率灰常第,说多了都是泪。。。建议分步切,体系数增加,避免回收损失浓度低,祝好运!
3楼2019-04-29 16:53:00
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眺望爱

铜虫 (初入文坛)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-30 22:20:43
这个如果可以最好找那种能共用buff的酶,不同buff最好分开切,因为盐离子浓度不一样,导致酶切效率降低,特别是xbal这个酶本来就效率低,要是酶切开就搞笑了。所以要么换酶,要么切完直接过柱回收再切,可以切个两管,这样提高总体的量

发自小木虫Android客户端
目标:生物的星辰大海!!!!
4楼2019-05-30 17:00:44
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温柔的小笛子

新虫 (正式写手)

我用过不同buffer的酶选择其中的一种buffer可以切开,不嫌麻烦的话可以先切一种再切另一种

发自小木虫Android客户端
5楼2020-01-07 00:22:14
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

XbaI+NotI双酶切推荐的是0.5*K+BSA啊。
6楼2020-01-13 15:29:00
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spectorno11

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7楼2020-01-13 18:39:36
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