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刘潘刘

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 金纳米 GNP-PEG5000-COOH活化后连接蛋白 已有1人参与

购买的用PEG50000修饰的金纳米,然后想利用PEG5000的羧基和蛋白的氨基进行偶联,但将在500ul GNP-PEG5000离心后,加入200ul 0.01 M 的MES(PH 5.5)(含有0.01 M EDC和 0.02 M NHS)后活化30min,刚加入时颜色就变成紫黑色,慢慢越来越黑。离心后都是黑色物质(金纳米聚集吧)附着在离心管管壁上,用SCB(PH 10)或水都溶不了。

想请教一下,这个问题怎么解决?
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天生我材必有用,娘养其儿定腾达。
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consequently

金虫 (小有名气)

大男孩

【答案】应助回帖

感觉是EDC和NHS还有pH的影响,另外可能PEG修饰的密度不够也是一个原因。在确定PEG5000-羧基修饰没问题,密度足够的前提下,EDC偶联蛋白也最好改个条件。
我之前用EDC偶联streptavidin蛋白成功了,你可以参考我的实验方案:1毫升20mM HEPES或者PBSbuffer(pH7.4),将颗粒和
蛋白混合,再加入20微升5mg/ml的EDC,反应4h就可以了。蛋白的量可以适当调整。
postDocinSIAT,CAS
3楼2019-05-30 13:03:08
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18865516955

新虫 (初入文坛)

我也遇到了相识问题,请问解决了么

发自小木虫Android客户端
2楼2019-05-29 23:40:24
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刘潘刘

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by consequently at 2019-05-30 13:03:08
感觉是EDC和NHS还有pH的影响,另外可能PEG修饰的密度不够也是一个原因。在确定PEG5000-羧基修饰没问题,密度足够的前提下,EDC偶联蛋白也最好改个条件。
我之前用EDC偶联streptavidin蛋白成功了,你可以参考我的实 ...

谢谢您的回复,后期我做一下
天生我材必有用,娘养其儿定腾达。
4楼2019-06-29 09:25:50
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