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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 学术讨论 » 金纳米 GNP-PEG5000-COOH活化后连接蛋白
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刘潘刘

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 金纳米 GNP-PEG5000-COOH活化后连接蛋白 已有1人参与

购买的用PEG50000修饰的金纳米，然后想利用PEG5000的羧基和蛋白的氨基进行偶联，但将在500ul GNP-PEG5000离心后，加入200ul 0.01 M 的MES（PH 5.5）（含有0.01 M EDC和 0.02 M NHS）后活化30min，刚加入时颜色就变成紫黑色，慢慢越来越黑。离心后都是黑色物质（金纳米聚集吧）附着在离心管管壁上，用SCB（PH 10）或水都溶不了。

想请教一下，这个问题怎么解决？
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天生我材必有用，娘养其儿定腾达。
1楼 2019-04-20 10:48:57
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18865516955

新虫 (初入文坛)
我也遇到了相识问题，请问解决了么

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2楼2019-05-29 23:40:24
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consequently

金虫 (小有名气)

大男孩

【答案】应助回帖

感觉是EDC和NHS还有pH的影响，另外可能PEG修饰的密度不够也是一个原因。在确定PEG5000-羧基修饰没问题，密度足够的前提下，EDC偶联蛋白也最好改个条件。
我之前用EDC偶联streptavidin蛋白成功了，你可以参考我的实验方案：1毫升20mM HEPES或者PBSbuffer（pH7.4），将颗粒和
蛋白混合，再加入20微升5mg/ml的EDC，反应4h就可以了。蛋白的量可以适当调整。
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postDocinSIAT,CAS
3楼2019-05-30 13:03:08
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刘潘刘

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by consequently at 2019-05-30 13:03:08
感觉是EDC和NHS还有pH的影响，另外可能PEG修饰的密度不够也是一个原因。在确定PEG5000-羧基修饰没问题，密度足够的前提下，EDC偶联蛋白也最好改个条件。
我之前用EDC偶联streptavidin蛋白成功了，你可以参考我的实 ...

谢谢您的回复，后期我做一下
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天生我材必有用，娘养其儿定腾达。
4楼2019-06-29 09:25:50
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