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王文洁

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌 场发射扫描电镜

各位大师们好,我最近做扫描电镜,老发现未处理的菌比处理的菌还要凹陷,有孔洞,我的具体做法如下:
处理后的菌悬液(未处理菌液在0.85%NaCl溶液里)——6000r/min 4℃ 2min 离心,弃上清——加入预冷(4℃)2.5%戊二醛,4℃冰箱固定4h——2700g 4℃ 10min离心,弃上清——Pbs洗涤样品3次——2700g 4℃ 10min离心,弃上清——10% 30% 50% 70% 80% 90%乙醇逐级脱水1次(吹打混匀静置10min)——2700g 4℃ 10min离心,弃上清——100%乙醇脱水2次(吹打混匀静置10min)——2700g 4℃ 10min离心,弃上清——乙酸异戊酯置换乙醇2次(吹打混匀静置10min)——2700g 25℃ 10min离心,弃上清,最后一次勿将液体全部倒掉,留微量——混匀,滴在硅片——自然晾干,然后在40℃烘箱放30 min,最后在培养皿垫张滤纸,在培养皿里(盖盖)在干燥器里过夜存放——第二天喷金120s——电镜观察。
Pbs缓冲液(0.1mol/L,pH7.2),戊二醛是用pbs配的。
谢谢各位,真的好奇怪。@天使托
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gangbadiez

新虫 (小有名气)

您好。冒昧请教,在做细菌电镜时,您的戊二醛是如何配置的呢?我用0.1MPBS缓冲液配制的2.5%戊二醛,非常容易变黄并逐渐深化、浑浊
2楼2021-12-12 18:38:16
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