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王文洁

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 40.7
帖子: 26
在线: 4.1小时
虫号: 8773060
注册: 2018-05-16
专业: 食品科学基础

[求助] 大肠杆菌场发射扫描电镜

各位大师们好，我最近做扫描电镜，老发现未处理的菌比处理的菌还要凹陷，有孔洞，我的具体做法如下：
处理后的菌悬液（未处理菌液在0.85%NaCl溶液里）——6000r/min 4℃ 2min 离心，弃上清——加入预冷（4℃）2.5%戊二醛，4℃冰箱固定4h——2700g 4℃ 10min离心，弃上清——Pbs洗涤样品3次——2700g 4℃ 10min离心，弃上清——10% 30% 50% 70% 80% 90%乙醇逐级脱水1次（吹打混匀静置10min）——2700g 4℃ 10min离心，弃上清——100%乙醇脱水2次（吹打混匀静置10min）——2700g 4℃ 10min离心，弃上清——乙酸异戊酯置换乙醇2次（吹打混匀静置10min）——2700g 25℃ 10min离心，弃上清，最后一次勿将液体全部倒掉，留微量——混匀，滴在硅片——自然晾干，然后在40℃烘箱放30 min,最后在培养皿垫张滤纸，在培养皿里（盖盖）在干燥器里过夜存放——第二天喷金120s——电镜观察。
Pbs缓冲液（0.1mol/L,pH7.2），戊二醛是用pbs配的。
谢谢各位，真的好奇怪。@天使托

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1楼 2019-04-11 21:05:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gangbadiez

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 267.2
散金: 30
帖子: 62
在线: 24.1小时
虫号: 5128577
注册: 2016-10-17
专业: 其他无机非金属材料

您好。冒昧请教，在做细菌电镜时，您的戊二醛是如何配置的呢？我用0.1MPBS缓冲液配制的2.5%戊二醛，非常容易变黄并逐渐深化、浑浊

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