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[交流]
有关293 转染问题
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| 各位战友，我现在做用hek-293做转染，我的质粒是氨苄抗性的，我想请教一下是不是所有的细胞质粒转染的筛选都可以用G418？ |
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山东省优青 青B通知了？？？？
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2楼2019-04-11 17:08:53
3楼2019-04-12 17:18:03
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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| 最好在转染过程中用无血清培养基，血清会对转染效率有一定的影响。2、转染时细胞密度最好在60-80%，像我们平时使用的RFect sRNA Transfection Reagent对细胞几乎没有毒性，要求我们的细胞密度40%就可以了。如果细胞活性比较好，抗毒性比较好,试剂毒性小（一般在传代后18-24h效果比较好），b、细胞凋亡后能保持一定的细胞数（收蛋白，或是RNA，细胞太少是不行的）。3、转染试剂和siRNA比例问题，这个一般在1-5：1之间，因为细胞种系等的不同，这个一般要自己摸索的的时候可以降低细胞融合度，但是要注意a、细胞出于对数分裂期的时候转染效率是最好的，严格按照说明书做，马虎不得，特别是时间的控制也特别重要。 |
4楼2019-06-21 16:53:08