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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » PEG介导的真菌原生质体转化子长不大 只有白白的菌丝
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qibowen123

新虫 (小有名气)

[求助] PEG介导的真菌原生质体转化子长不大 只有白白的菌丝 已有1人参与

最近在做米曲霉原生质体转化，用的是双层缺陷培养基，质粒带精氨酸合成基因。理论上，导入后可以在缺陷培养基上生长。

问题是，PEG转化后，上层培养基能长出细小的白色菌丝，且生长到一定程度就不长了。 挑出接到丰富培养基可以继续长，在接回 缺陷培养基上就不长了。这正常吗？

真菌转化系统的阳性转化子到底应该怎么筛选，阳性转化子应该长什么样啊（我从来没见过T.T）

卡在这个问题上3个月了，求大神帮忙
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1楼 2019-04-08 10:40:48
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光麟之光

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 向文非的师妹 at 2023-04-06 15:04:10
请问楼主，你的问题解决了吗？我最近也在做米曲霉转化，跟你遇到的问题类似，平板培养第二天就长出了小菌丝菌落，菌落长不大，因为空白对照（未转质粒）也长了相同的菌丝菌落，所以这种情况应该是假阳性，为什么出现 ...

你好，方便交流一下吗，我最近也在做米曲霉的表达

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5楼2023-06-15 23:27:29
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france5885

新虫 (初入文坛)
请教一下楼主，你配制的PEG-氯化钙是澄清的还是混浊的？我配制的PEG4000是澄清的，加入氯化钙后就混浊了，这是正常的吗？
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2楼2019-11-07 09:52:59
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你的米曲霉菌种是什么菌种？还有所用的质粒是那个质粒呢？
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Flytothesky```
3楼2020-06-04 11:36:20
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向文非的师妹

新虫 (小有名气)
请问楼主，你的问题解决了吗？我最近也在做米曲霉转化，跟你遇到的问题类似，平板培养第二天就长出了小菌丝菌落，菌落长不大，因为空白对照（未转质粒）也长了相同的菌丝菌落，所以这种情况应该是假阳性，为什么出现假阳性，猜测一种原因是原生质体过滤的时候有未酶解完全的短小菌丝混进去，另外可能米曲霉出现了缺陷性状丢失（恢复了精氨酸合成功能），但是如果长不大的话，后面一种可能性不大。总之，能够成片生长的才可能是真阳性，长不大的是假阳性。不知楼主后面的实验怎么样？希望能交流一下
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4楼2023-04-06 15:04:10
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