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yuzhongbaihe

新虫 (正式写手)

[求助] 连接与转化实验已有1人参与

已经做了好几次连接与转化,也能长出单菌落来,但最后验证全都是假阳性克隆。我的质粒和目的基因的浓度和od值如图片所示。我之前做的连接体系,目的基因和质粒各为3微升。用t4快速连接酶22℃连接10分钟,也尝试过16℃过夜连,转进100微升dh5a(我自己制备的)中。求大神给分析一下,失败做不出来的原因。

连接与转化实验


@youlinglyw @wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个浓度是用nanodrop测的么?一般载体连接浓度一定要上去,用nanodrop测会有误差,跑一个电泳看看浓度

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3楼2019-03-31 18:41:03
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-03-31 18:39:57
目的基因加的量太少了 一般目的基因:载体为4:1 要目的基因尽可能多 因为载体太多会自连 要增加目的基因碰到载体的机会 所以要多加目的基因。另外 我没用过快速连接酶, 不知道你这个时间会不会略短

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2楼2019-03-31 18:02:04
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