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laijianxuan

金虫 (正式写手)

[交流] 反复冻融----胞内产物

请教各位老师:
通过反复冷冻的方法,能否破坏细胞膜,从而得到细胞膜内的蛋白多肽产物?
有相关文献资料吗?

提供者重重有赏!

[ Last edited by laijianxuan on 2009-5-14 at 11:19 ]
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yuhuimeiye

木虫 (著名写手)


laijianxuan(金币+1,VIP+0):谢谢指教 5-20 10:21
可以,将细胞在-80或液氮中冻,然后解冻,反复数次,裂解效果不错。
3楼2009-05-14 11:35:44
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baisuilan

金虫 (正式写手)


laijianxuan(金币+1,VIP+0):谢谢 5-20 10:20
我师兄用反复冻融法提取过包装细胞内的病毒颗粒。-80/37度反复快速冻融,应该是可以的。
2楼2009-05-14 11:05:10
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币


laijianxuan(金币+1,VIP+0):谢谢指教 5-20 10:21
可以的


(1)冷热交替

冷热交替是在90℃左右维持数分钟,立即放入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细胞可以被破碎,细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此技术。

(2)反复冻融

反复冻融是将待破碎的细胞冷至-15℃~-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,如此反复冻融多次,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞破碎。
上邪!我欲与君相知,长命无绝衰。山无陵,江水为竭,冬雷震震,夏雨雪,天地合,乃敢与君绝!
4楼2009-05-14 12:11:08
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liuke009

铁杆木虫 (著名写手)


laijianxuan(金币+1,VIP+0):谢谢指教 5-20 10:21
细胞膜内蛋白单纯的反复冻融可能效果还是不太理想,一定要加入高浓度的表面活性剂,比如CHAPS啥的,这是关键,即使不反复冻融,较长时间的低温超声应该也可以
祝好运
5楼2009-05-14 12:59:41
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