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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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[交流] 绝对定量pcr

想问一下绝对定量PCR使用荧光定量还是探针法？

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1楼 2019-03-20 08:56:35

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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探针法特异性较强，用TaqMan探针法做下来的实验数据会更为准确些，，但是也比较贵我们实验室后期计划用BIODA KITI检测目标DNA,探针法是在PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步，这也是定量的基础所在。

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