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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蓝白斑筛选菌落只长在培养基边缘
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lidannytc

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蓝白斑筛选菌落只长在培养基边缘

为什么我涂板后菌落只在培养基边缘生长？我用的是蓝白斑筛选，涂了IPTG和X-Gal的都是只在板子边缘稀稀拉拉长几个菌，不用IPTG和X-Gal，只是Amp筛选的话板子长得满满的很均匀，我重新换了IPTG和X-Gal还是出现同样的问题，不知道怎么回事？难道诱导后产生了毒性蛋白？我那么多不同的连接产物不会都产生毒性蛋白吧？真是郁闷，有哪位同仁之前也遇到过同样的问题帮忙解答一下吧？

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:55 ]
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1楼 2009-05-13 10:51:24
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
你可以不用蓝白筛选 只用AMP筛选 然后做个菌液PCR鉴定 插入大小对就可以了
对于蓝白筛这种转化问题 不用了解那么清楚 只要有插入片段 快往下作就对了
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2楼2009-05-13 16:46:24
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ZhX820423

木虫 (正式写手)
我最近做蓝白斑筛选也遇到这种情况，等待大神解疑
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3楼2009-05-14 09:58:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
我一般都不用蓝白斑筛选，菌液pcr或是提质粒跑个对照电泳再做个酶切，节约了X-Gal，而且也不怕出假阳性。
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Thank-you，so-blue.
4楼2009-05-14 12:30:22
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
首先我看到楼主提到表达毒性蛋白的问题，据我所知蓝白斑筛选采取的是插入失活的原理，不会有目的表达。
    蓝白斑筛选用的是一个很固定的菌株，不知道你用的是什么菌株。
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5楼2009-05-14 12:48:20
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adazalea

金虫 (正式写手)
居然有这种事情出现？
我做的蓝白斑筛选表现还不错，就是测序结果让我郁闷的不行！！
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朋友是悠闲时最想喝的那杯清茶。
6楼2009-05-24 10:18:59
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bioinfuture

铁虫 (小有名气)
疑惑呀，这是什么原因呢
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7楼2009-05-25 22:27:53
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