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lidannytc

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蓝白斑筛选菌落只长在培养基边缘

为什么我涂板后菌落只在培养基边缘生长?我用的是蓝白斑筛选,涂了IPTG和X-Gal的都是只在板子边缘稀稀拉拉长几个菌,不用IPTG和X-Gal,只是Amp筛选的话板子长得满满的很均匀,我重新换了IPTG和X-Gal还是出现同样的问题,不知道怎么回事?难道诱导后产生了毒性蛋白?我那么多不同的连接产物不会都产生毒性蛋白吧?真是郁闷,有哪位同仁之前也遇到过同样的问题帮忙解答一下吧?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:55 ]
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

首先我看到楼主提到表达毒性蛋白的问题,据我所知蓝白斑筛选采取的是插入失活的原理,不会有目的表达。
    蓝白斑筛选用的是一个很固定的菌株,不知道你用的是什么菌株。
5楼2009-05-14 12:48:20
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

你可以不用蓝白筛选 只用AMP筛选 然后做个菌液PCR鉴定 插入大小对就可以了
对于蓝白筛这种转化问题 不用了解那么清楚 只要有插入片段 快往下作就对了
2楼2009-05-13 16:46:24
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ZhX820423

木虫 (正式写手)

我最近做蓝白斑筛选也遇到这种情况,等待大神解疑
3楼2009-05-14 09:58:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

我一般都不用蓝白斑筛选,菌液pcr或是提质粒跑个对照电泳再做个酶切,节约了X-Gal,而且也不怕出假阳性。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-05-14 12:30:22
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