24小时热门版块排行榜    

查看: 2156  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

童剑军

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR与质粒PCR 已有2人参与

各位大佬 在下做的是将构建好的质粒转入到大肠杆菌DH5α中扩增  结果就是挑菌摇菌之后 用菌液为模板做PCR结果都没有 但是把该菌液用试剂盒提取质粒之后 用质粒PCR鉴定 有目的条带 大小也正确   让在下疑惑的是 同样的引物 为什么质粒PCR可以正常扩增目的条带 但是菌液PCR却做不出来  请各位大佬 帮忙解释一下 帮在下解惑  万分感谢!

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:16
同样的引物,同样的操作,如果你菌落pcr没有,质粒pcr有,这个说明你实验有问题,至少是在菌落pcr上是有问题的,
3楼2019-03-18 08:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

846145444

新虫 (初入文坛)

2楼2019-03-16 22:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:28
可以考虑一下你引物的问题了,原因是:质粒PCR可以,你已经去除了蛋白和其他杂质,说明没有问题
你菌液pcr,如果只是单纯的挑个单菌落作为pcr模板,菌液裂解会释放核酸和蛋白,如果你引物设计的恰好和其他质粒外的DNA有一些不良结构,没有结果也是意料中的可能;
建议,如果是菌液pcr,你可以试一下,把菌落煮沸以后,离心取上清做模板,可能有结果
4楼2019-03-18 12:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buchongyang

铜虫 (小有名气)

楼主挑菌的时候有没有煮沸呢?

发自小木虫Android客户端
5楼2019-03-20 23:10:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工284求调剂 +10 小黑想变白 2026-03-07 10/500 2026-03-10 06:46 by laoshidan
[考研] 新疆大学地质与矿业工程学院招生 +24 another12 2026-03-04 32/1600 2026-03-10 01:15 by 1111--
[考博] 2026博士申请 +5 起泡酒 2026-03-08 5/250 2026-03-09 20:09 by 风傲孤星
[考研] 320材料与化工,求调剂 +11 鹤遨予卿 2026-03-04 13/650 2026-03-09 19:39 by 30660438
[考研] 086000生物与医药319分求调剂 +4 Tolkien 2026-03-07 4/200 2026-03-09 13:49 by macy2011
[考研] 一志愿山东大学105500药学专硕,总分302求调剂 +5 五维天空 2026-03-04 11/550 2026-03-09 09:51 by 五维天空
[考研] 303求调剂 +8 forgman95 2026-03-05 10/500 2026-03-08 12:41 by 蓝莓都给你
[基金申请] 进入个人成果库好难,一下午都没进去 +6 mi_dilee 2026-03-05 6/300 2026-03-08 11:43 by lan111
[考研] 一志愿郑大071000分数282求调剂 +3 研研颜 2026-03-05 7/350 2026-03-07 22:33 by 帆船哥
[考研] 278求调剂 +5 Gale1314 2026-03-06 5/250 2026-03-07 14:41 by 2735147993
[考研] 276求调剂 本科天津工业大学 一志愿北京化工大学0855 +4 路lyh123 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:37 by shdliugang
[考研] 一志愿中石油,化学工程,301求调剂 +4 豚馒枳枳 2026-03-04 4/200 2026-03-06 22:15 by 星空星月
[考研] 材料专硕290求调剂 +8 杰尼龟aaa 2026-03-04 8/400 2026-03-06 16:06 by @飒飒飒飒
[考研] 275求调剂 +4 大爆炸难民 2026-03-06 5/250 2026-03-06 09:21 by guoweigw
[考研] 化工282求调剂一志愿211 +5 NA0912 2026-03-05 6/300 2026-03-05 20:10 by 2735147993
[考研] 复试调剂 +5 呼呼?~+123456 2026-03-05 5/250 2026-03-05 19:43 by caszguilin
[考研] 求调剂 +7 博斯特525 2026-03-04 7/350 2026-03-04 18:09 by houyaoxu
[考研] 0703化学求调剂 +3 将未有期 2026-03-04 3/150 2026-03-04 16:19 by sslc1985
[考研] 085601 材料工程 320 +6 和乐瑶 2026-03-03 6/300 2026-03-04 16:01 by chixmc
[考研] 298求调剂 +3 人间唯你是清欢 2026-03-03 4/200 2026-03-03 18:09 by ms629
信息提示
请填处理意见