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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR与质粒PCR
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童剑军

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR与质粒PCR 已有2人参与

各位大佬 在下做的是将构建好的质粒转入到大肠杆菌DH5α中扩增  结果就是挑菌摇菌之后 用菌液为模板做PCR结果都没有 但是把该菌液用试剂盒提取质粒之后 用质粒PCR鉴定 有目的条带 大小也正确   让在下疑惑的是 同样的引物 为什么质粒PCR可以正常扩增目的条带 但是菌液PCR却做不出来  请各位大佬 帮忙解释一下 帮在下解惑  万分感谢！

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2019-03-16 21:52:08
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846145444

新虫 (初入文坛)
为什么呢

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2楼2019-03-16 22:51:31
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:16
同样的引物，同样的操作，如果你菌落pcr没有，质粒pcr有，这个说明你实验有问题，至少是在菌落pcr上是有问题的，
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3楼2019-03-18 08:54:04
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2019-03-18 21:05:28
可以考虑一下你引物的问题了，原因是：质粒PCR可以，你已经去除了蛋白和其他杂质，说明没有问题
你菌液pcr，如果只是单纯的挑个单菌落作为pcr模板，菌液裂解会释放核酸和蛋白，如果你引物设计的恰好和其他质粒外的DNA有一些不良结构，没有结果也是意料中的可能；
建议，如果是菌液pcr，你可以试一下，把菌落煮沸以后，离心取上清做模板，可能有结果
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4楼2019-03-18 12:52:12
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buchongyang

铜虫 (小有名气)
楼主挑菌的时候有没有煮沸呢？

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5楼2019-03-20 23:10:42
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