24小时热门版块排行榜    

查看: 1171  |  回复: 13
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于感受态细胞的制备及转化,急助

各位虫友帮忙来看看,我们都急死了。
    最近做了3次感受态细胞,但是每一次用PUC19转化,平板上居然连一个转化子都没有,次次都是这样。
    请问下42摄氏度的热激真有那么关键吗?因为我们的水浴锅实际温度可能只有41度。
    还有,除了这个可能原因之外,我们排除了试剂和其他操作的原因,会不会有可能是菌种出了问题?
    各位有啥经验,能否提供些信息?若这个问题解决了,必有重金酬谢!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

回楼上的,我们试剂应该是没问题的,因为第一次做的时候,现像是正常的,但是第二次做的时候就转不出来了,百思不得其解,不清楚原因在哪里
3楼2009-05-12 21:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

mimisikai

金虫 (小有名气)

★ ★
spiderboy(金币+2,VIP+0):谢谢 5-12 21:54
41度和42度相差不大 我用52度还成功转化过

问题在你的感受态 试剂很重要 要保证一定的纯度 尤其是氯化钙 也可以尝试加点氯化镁

全程保持低温更是关键

我做出来的感受态用一年也很好
2楼2009-05-12 21:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taizf

金虫 (小有名气)


spiderboy(金币+1,VIP+0):谢谢 5-12 22:33
一点经验:关键是全程冰浴和密度合适。完成后放入4摄氏度过夜,第二天加15%甘油液氮速冻,-70保存。
4楼2009-05-12 21:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)


spiderboy(金币+1,VIP+0):谢谢。。我们用PUC19来验证,都转化 不了 5-13 08:07
你可以用你的那个载体(没有酶切过的)去转化验证一下,如果再不长,那肯定是你的菌有问题,或者你的感受态有问题。我没做过化学感受态的,做过电转化的感受态,也失败了好几次。我觉得全程一定要低温,速度要快!另外是不是抗生素浓度太高了?或者你连的DNA片段太大了,转化不进去?
5楼2009-05-12 22:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 0854 考研调剂 招生了!AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见