24小时热门版块排行榜    

查看: 1067  |  回复: 3

星星不太萌

新虫 (小有名气)

[求助] 构建载体 已有1人参与

载体和目的片段连接好后,挑阳性克隆菌落,PCR验证有目的条带,酶切验证却切不下来,送PCR产物,测序结果显示目的序列在,就是酶切不下来,请教各位大神,这是什么原因呢?

@wizardfan @biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)

★ ★
星星不太萌(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-03 16:34:03
1. 内切酶或者buffer的问题(不过你目的基因和载体都切好了证明没问题);2.质粒提取浓度低或者质量不好(摇菌8小时以上再提质粒,可以适当加大菌液使用量);3.直接送质粒去测序 进行验证

发自小木虫IOS客户端
2楼2019-03-03 02:01:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星不太萌

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-03-03 02:01:59
1. 内切酶或者buffer的问题(不过你目的基因和载体都切好了证明没问题);2.质粒提取浓度低或者质量不好(摇菌8小时以上再提质粒,可以适当加大菌液使用量);3.直接送质粒去测序 进行验证
...

一般质粒提取的浓度8ml菌液可以提300多ng/ul,还是直接送质粒测序比较可靠,菌液PCR和提质粒PCR跑出来的条带不一样。

发自小木虫Android客户端
3楼2019-03-03 09:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

965688871

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议你用载体通用引物进行菌检。然后送菌抽质粒测序。

如果测序正确还切不开,再找buffer和内切酶的问题。
4楼2019-03-04 08:16:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星星不太萌 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +9 archvillain 2026-08-02 11/550 2026-08-02 15:44 by alexon
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 8/400 2026-08-02 15:01 by jHcrHMhbKCFV
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 14/700 2026-08-02 14:58 by jHcrHMhbKCFV
[博后之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 18/900 2026-08-02 14:52 by jHcrHMhbKCFV
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 12/600 2026-08-02 13:43 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +17 低垂的野花 2026-07-31 23/1150 2026-08-02 13:41 by RRRKKK
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 13:34 by jHcrHMhbKCFV
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 14/700 2026-08-02 13:34 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 7/350 2026-08-02 07:59 by 88817753
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
信息提示
请填处理意见