应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建载体
41/1返回列表
查看: 1211  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

星星不太萌

新虫 (小有名气)

[求助] 构建载体 已有1人参与

载体和目的片段连接好后，挑阳性克隆菌落，PCR验证有目的条带，酶切验证却切不下来，送PCR产物，测序结果显示目的序列在，就是酶切不下来，请教各位大神，这是什么原因呢？

@wizardfan @biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-02 16:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)
★ ★
星星不太萌(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-03 16:34:03
1. 内切酶或者buffer的问题（不过你目的基因和载体都切好了证明没问题）；2.质粒提取浓度低或者质量不好（摇菌8小时以上再提质粒，可以适当加大菌液使用量）；3.直接送质粒去测序 进行验证

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-03-03 02:01:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星不太萌

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-03-03 02:01:59
1. 内切酶或者buffer的问题（不过你目的基因和载体都切好了证明没问题）；2.质粒提取浓度低或者质量不好（摇菌8小时以上再提质粒，可以适当加大菌液使用量）；3.直接送质粒去测序 进行验证
...

一般质粒提取的浓度8ml菌液可以提300多ng/ul，还是直接送质粒测序比较可靠，菌液PCR和提质粒PCR跑出来的条带不一样。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-03-03 09:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

965688871

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你用载体通用引物进行菌检。然后送菌抽质粒测序。

如果测序正确还切不开，再找buffer和内切酶的问题。
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-04 08:16:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星星不太萌 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-02 00:47 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-02 00:29 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-02 00:24 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 00:21 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:21 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-02 00:08 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 23:55 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:24 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:45 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭