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请教一些可溶性表达方法
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各位高手，目前在做重组菌可溶性表达，有一些问题请教： 1、关于自动诱导培养基：山梨醇和甜菜碱是直接配培养基时加入还是像IPTG那样加入？该培养基是不是不需要再加诱导物？ 2、关于加入葡萄糖做为启动抑制剂，在什么时候加入？ 3、用缓冲液维持发酵液在发酵过程中的pH，请问一般用什么缓冲液？浓度多少合适？ 4、报道说丰富的培养基也可以促使可溶表达，请教如LB的话，酵母粉、胰蛋白胨、NaCl一般都增加多少？NaCl是否需要加大量？ 呵呵，问题比较多！请大家耐心赐教啊！感激不尽！   |
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4楼2009-05-11 18:49:04
| 我只是按照自己的理解说下，不知道能不能对LZ有帮助：1.自诱导培养基我没有用过，因为以前试的时候发现对于可溶性重组表达效果并不是很明显，但我觉得自诱导培养基里面的这些物质，你可以看它混配一起灭菌时会不会起反应，如果没有反应就可以一起配，培养的时候也无需外加诱导剂；2.葡萄糖我实验里也加过，但是我不是用来做启动抑制剂，而是做C源为培养基组分的，是单灭后接种前加的；3.用缓冲液维持pH时，我用的磷酸盐缓冲液（二氢钾和氢二钾），我是按TB配方配的，你可以查查；4.丰富的培养基是可以促使可溶表达，因为里面有可能会含有一些类似物，而LB的话，我们用了效果不行，几乎没有可溶表达，LB的配方：酵母粉5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，一般只是用来扩增培养工程菌的，酵母粉和NaCl对可溶表达做用比较明显，后者浓度大了可能会导致膜渗透压的改变而促使分泌表达！ |
2楼2009-05-11 11:34:54
3楼2009-05-11 13:52:21