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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 请教一些可溶性表达方法

各位高手,目前在做重组菌可溶性表达,有一些问题请教:
1、关于自动诱导培养基:山梨醇和甜菜碱是直接配培养基时加入还是像IPTG那样加入?该培养基是不是不需要再加诱导物?
2、关于加入葡萄糖做为启动抑制剂,在什么时候加入?
3、用缓冲液维持发酵液在发酵过程中的pH,请问一般用什么缓冲液?浓度多少合适?
4、报道说丰富的培养基也可以促使可溶表达,请教如LB的话,酵母粉、胰蛋白胨、NaCl一般都增加多少?NaCl是否需要加大量?

呵呵,问题比较多!请大家耐心赐教啊!感激不尽!
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shenqicc

金虫 (小有名气)

我只是按照自己的理解说下,不知道能不能对LZ有帮助:1.自诱导培养基我没有用过,因为以前试的时候发现对于可溶性重组表达效果并不是很明显,但我觉得自诱导培养基里面的这些物质,你可以看它混配一起灭菌时会不会起反应,如果没有反应就可以一起配,培养的时候也无需外加诱导剂;2.葡萄糖我实验里也加过,但是我不是用来做启动抑制剂,而是做C源为培养基组分的,是单灭后接种前加的;3.用缓冲液维持pH时,我用的磷酸盐缓冲液(二氢钾和氢二钾),我是按TB配方配的,你可以查查;4.丰富的培养基是可以促使可溶表达,因为里面有可能会含有一些类似物,而LB的话,我们用了效果不行,几乎没有可溶表达,LB的配方:酵母粉5g/L,胰蛋白胨10g/L,NaCl5g/L,一般只是用来扩增培养工程菌的,酵母粉和NaCl对可溶表达做用比较明显,后者浓度大了可能会导致膜渗透压的改变而促使分泌表达!
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2楼2009-05-11 11:34:54
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clf0803

银虫 (正式写手)

谢谢 shenqicc
你是无锡的?我也是,有机会当面请教啊?
3楼2009-05-11 13:52:21
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jqq1985

银虫 (正式写手)

葡萄糖是在开始的时候加入,抑制表达,等葡糖消耗完了,菌也涨到一定浓度了,就自动分泌表达了。缓冲用磷酸缓冲,20mM~25mM。
4楼2009-05-11 18:49:04
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