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实时定量PCR步骤
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| 哪位大侠有实时定量PCR的详细操作步骤，我是初学者。谢谢 |
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3楼2019-02-22 08:42:58
BioThriller
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 25.9
- 帖子: 9
- 在线: 12.5小时
- 虫号: 2469274
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吃瓜的半仙: 金币+3, 谢谢 2019-02-22 08:41:09
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吃瓜的半仙: 金币+3, 谢谢 2019-02-22 08:41:09
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以下是SYBR Green 的Protocol 1x H2O 6.3μl SYBR Reagent 5μl Fwd 10uM 0.1 μl Rev 10uM 0.1 μl 这四个试剂可以做一个Mix，分装 最后加cDNA cDNA 1:5 1.0 μl (注：cDNA 可以稀释为1：10，或者 1：5 ，可以先试验一下） Total 12.5μl qRT-PCR 程序 （我们用的是Roche LightCycler 480 II） 95°C 2 min, 40 cycles (95°C, 15 s; 60°C, 30 s; 68°C, 20 s). 最后Relative expression 用2-△△CT 法， 如果第一次做新引物，记得单独跑一下引物看看溶解曲线，希望对你有帮助。具体过程中应该还有很多需要注意的事情，也会出现各种问题，网上也有挺多的帖子，最好找个人带一下！ |
2楼2019-02-21 23:03:26
