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Cas9做肺癌细胞的基因敲除，用体外导入Cas9蛋白的效率如何？
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CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。 Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。 研究人员为了将CRISPR/Cas9技术发展为高效的基因打靶工具，又进行了优化和改造。Cong, L.等人在不影响系统效率的情况下，将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA。通过这种简化，CRISPR/Cas9系统现仅包括两个元素：Cas9蛋白和sgRNA（single guide RNA）。因此现在人们将CRISPR/Cas9技术也称为Cas9/sgRNA技术。 最近做到了肺癌细胞某段基因的敲除，前面的师兄师姐都是用的转cas9质粒进细胞表达的方式做的实验。老师让我试一下通过体外导入Cas9蛋白的方式来进行。有用过这个方法做的吗？是通过转染试剂直接导入吗? 然后在丁xx通上找到了一家做cas系列蛋白很全的商家， https://www.biomart.cn/63867/index.htm cas9，dcas9，cas12a，cas13a都有。这几个蛋白的区别有人知道吗？ |
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tongbujing 
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2楼2019-06-16 16:11:08