| 查看: 1159 | 回复: 1 | |||
[交流]
Cas9做肺癌细胞的基因敲除，用体外导入Cas9蛋白的效率如何？
|
|
CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。 Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。 研究人员为了将CRISPR/Cas9技术发展为高效的基因打靶工具，又进行了优化和改造。Cong, L.等人在不影响系统效率的情况下，将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA。通过这种简化，CRISPR/Cas9系统现仅包括两个元素：Cas9蛋白和sgRNA（single guide RNA）。因此现在人们将CRISPR/Cas9技术也称为Cas9/sgRNA技术。 最近做到了肺癌细胞某段基因的敲除，前面的师兄师姐都是用的转cas9质粒进细胞表达的方式做的实验。老师让我试一下通过体外导入Cas9蛋白的方式来进行。有用过这个方法做的吗？是通过转染试剂直接导入吗? 然后在丁xx通上找到了一家做cas系列蛋白很全的商家， https://www.biomart.cn/63867/index.htm cas9，dcas9，cas12a，cas13a都有。这几个蛋白的区别有人知道吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
面上有专家说实验设备不是我们单位的
已经有8人回复
-
科研求助
已经有4人回复
-
博士去二本高校当辅导员，如何调整心态？
已经有11人回复
-
江苏省自然基金 什么时候出结果
已经有6人回复
-
闲聊
已经有3人回复
-
初秋的晨风
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
tongbujing 
禁言 (初入文坛)
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2019-06-16 16:11:08