24小时热门版块排行榜    

查看: 1890  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

su3

银虫 (小有名气)

[交流] 菌种活化具体步骤

使用甘油一般冷冻的方法(大概-20度)保存的,从冰箱拿出来室温解冻?振荡?划线?然后在用肉汤摇床培养?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

放-20有可能冻死了……
如果是-80拿出来的,其实,真要是直接丢到有抗性的液体培养基也是能够活化的
细菌没那么脆弱
当然如果你是什么需要产什么蛋白的菌,就最好按照普通LB平板划线挑形态ok的单克隆分步扩增
我只是用来存质粒的,属于克隆宿主,所以我每次都不管直接丢加了抗性的培养基摇,照样做实验
5楼2009-05-09 13:51:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

su3

银虫 (小有名气)

怎么没人回答我呢?
2楼2009-05-08 20:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunpeng306

银虫 (初入文坛)

首先,应该和你讨论的是:你放入-20度的环境保藏菌种,并不是很好。最好用液氮保藏或者-70度的冰箱的保藏,菌种比较稳定。
其实,菌种的活化步骤如下:
第一天:
1、放入4℃,一直到变成液状;(用液氮保藏直接放入37度的温水中,待变成液体 状,直接划线培养)
2、制备固体培养基,灭菌后,在超净工作台进行以下操作:
3、制备液倒入无菌培养皿,每培养皿约25ml;
4、待凝固后,用接种环,划板;
5、水平放置半小时以上,待菌吸附在培养基上。
5、用保鲜膜或者封口膜密封培养皿,倒置于37℃恒温箱中过夜;
第二天:
6、制备150mL液体培养基,灭菌后,在超净工作台进行以下操作:
8、挑平板上单个菌落,至液体培养液中,200rpm摇床过夜;

这样培养的菌液放入4度冰箱,可以在一周内做后续的实验。但是超过一周,就别用了。还有上述的平板放到4度的冰箱里,可以在两周内重新扩大培养成菌液。但是超过2周,就别用了,活性和特性都不稳定。
3楼2009-05-09 10:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlyu1228

新虫 (小有名气)

如果你该管还想继续保存,有管内菌未解冻的情况下,接种环烧红后立即伸处管中,后于平板划线。最好于-70度保存
6楼2009-05-11 21:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见