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su3

银虫 (小有名气)

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虫号: 700406
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[交流] 菌种活化具体步骤

使用甘油一般冷冻的方法（大概-20度）保存的，从冰箱拿出来室温解冻？振荡？划线？然后在用肉汤摇床培养？

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1楼 2009-05-07 19:38:20

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sunpeng306

银虫 (初入文坛)

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虫号: 762044
注册: 2009-05-03

首先，应该和你讨论的是：你放入-20度的环境保藏菌种，并不是很好。最好用液氮保藏或者-70度的冰箱的保藏，菌种比较稳定。
其实，菌种的活化步骤如下：
第一天：
1、放入4℃，一直到变成液状；（用液氮保藏直接放入37度的温水中，待变成液体状，直接划线培养）
2、制备固体培养基，灭菌后，在超净工作台进行以下操作：
3、制备液倒入无菌培养皿，每培养皿约25ml；
4、待凝固后，用接种环，划板；
5、水平放置半小时以上，待菌吸附在培养基上。
5、用保鲜膜或者封口膜密封培养皿，倒置于37℃恒温箱中过夜；
第二天：
6、制备150mL液体培养基，灭菌后，在超净工作台进行以下操作：
8、挑平板上单个菌落，至液体培养液中，200rpm摇床过夜；

这样培养的菌液放入4度冰箱，可以在一周内做后续的实验。但是超过一周，就别用了。还有上述的平板放到4度的冰箱里，可以在两周内重新扩大培养成菌液。但是超过2周，就别用了，活性和特性都不稳定。