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huanshi

银虫 (小有名气)

[交流] 求助,有关高保真酶

我现在想买个高保真酶,问下大家都用的是什么产品。。

谢谢大家了。。。

[ Last edited by huanshi on 2009-5-7 at 15:08 ]
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wwwkkk83

木虫 (著名写手)

TaKaRa   Pyrobest

  Toyobo  KOD
2楼2009-05-07 15:08:10
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huanshi

银虫 (小有名气)

我用TaKaRa Taq扩片段的时候不是很好扩,有时候扩不出来。。

片段长度是1600bp左右,不知道TaKaRa   Pyrobest 扩增效率怎么样?
3楼2009-05-07 15:13:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

takara的扩增能力不好
用过一次TOYOBO KOD plus,扩增能力还行,但是不能和Invitrogen的比
保真度方面我还没测序,才刚刚做的克隆
打算以后改用Invitrogen的Pfx,不知道效果如何
4楼2009-05-07 15:23:11
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huanshi

银虫 (小有名气)

takara 的 PrimeSTAR™ HS DNA Polymerase怎么样?

有人说可以。。。
5楼2009-05-07 15:26:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

从来不相信takara的酶如何如何好
6楼2009-05-07 15:38:12
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士

invitogen pfxtap 扩增效率比普通高,保真是普通taq的32倍。就是贵!国内分装不行,必须原装。
123
7楼2009-05-07 18:52:21
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huanshi

银虫 (小有名气)

决定了,打算用invitogen的Platinum Pfx DNA Polymerase

请教下:

我做完PCR后要克隆到T载体中,不知道用Platinum Pfx DNA Polymerase所得到的产物末端有A吗?如果没有,要做加A反应的话,反应体系具体是多少?
8楼2009-05-07 19:18:15
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

不用很迷信保真度有多高,诚然高品质的酶更加可信,现在很多公司的产品品质也都很稳定。takara的Pyrobest我用过批3000bp,保真度没问题,只不过takara中国化了,也像国产货了,国产的pfu我也用过,结果呢,也没有问题。国外的,我用过NEB,fermentas的高保真,也没有错批过。invitogen的我没用过,但是如果看公司给的数据的话,bio-rad的pfu是普通taq的52倍,比pfu高6倍,从数据上看要比invitogen的好很多,我也用过,当然效果没问题的,可实际上你用任何一个公司的都可以达到一个效果,这就有性价比的因素了。所以,你可以根据自己实验室的能力购买,经费足,买进口的,图个踏实。经费紧张买国产的,不会出大岔子的,我想你实验最重要的不是pcr,应该是后续工作,所以经费紧张得话takara和国产的都没问题。

[ Last edited by elvias on 2009-5-7 at 23:22 ]
9楼2009-05-07 19:20:12
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)

很多高保真的酶所得到的产物末端没有A,加A要加Taq酶,我做得是50微升加0.5-1微升,跟平时做PCR加的量相同,72度30-60min。
10楼2009-05-07 19:27:45
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