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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，有关高保真酶
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huanshi

银虫 (小有名气)

[交流] 求助，有关高保真酶

我现在想买个高保真酶，问下大家都用的是什么产品。。

谢谢大家了。。。

[ Last edited by huanshi on 2009-5-7 at 15:08 ]
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1楼 2009-05-07 15:05:30
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wwwkkk83

木虫 (著名写手)
TaKaRa   Pyrobest

  Toyobo  KOD
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2楼2009-05-07 15:08:10
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huanshi

银虫 (小有名气)
我用TaKaRa Taq扩片段的时候不是很好扩，有时候扩不出来。。

片段长度是1600bp左右，不知道TaKaRa   Pyrobest 扩增效率怎么样？
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3楼2009-05-07 15:13:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
takara的扩增能力不好
用过一次TOYOBO KOD plus，扩增能力还行，但是不能和Invitrogen的比
保真度方面我还没测序，才刚刚做的克隆
打算以后改用Invitrogen的Pfx，不知道效果如何
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4楼2009-05-07 15:23:11
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huanshi

银虫 (小有名气)
takara 的 PrimeSTAR™ HS DNA Polymerase怎么样？

有人说可以。。。
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5楼2009-05-07 15:26:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
从来不相信takara的酶如何如何好
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6楼2009-05-07 15:38:12
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士
invitogen pfxtap 扩增效率比普通高，保真是普通taq的32倍。就是贵！国内分装不行，必须原装。
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123
7楼2009-05-07 18:52:21
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huanshi

银虫 (小有名气)
决定了，打算用invitogen的Platinum Pfx DNA Polymerase

请教下：

我做完PCR后要克隆到T载体中，不知道用Platinum Pfx DNA Polymerase所得到的产物末端有A吗？如果没有，要做加A反应的话，反应体系具体是多少？
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8楼2009-05-07 19:18:15
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
不用很迷信保真度有多高，诚然高品质的酶更加可信，现在很多公司的产品品质也都很稳定。takara的Pyrobest我用过批3000bp，保真度没问题，只不过takara中国化了，也像国产货了，国产的pfu我也用过，结果呢，也没有问题。国外的，我用过NEB,fermentas的高保真，也没有错批过。invitogen的我没用过，但是如果看公司给的数据的话，bio-rad的pfu是普通taq的52倍，比pfu高6倍，从数据上看要比invitogen的好很多，我也用过，当然效果没问题的，可实际上你用任何一个公司的都可以达到一个效果，这就有性价比的因素了。所以，你可以根据自己实验室的能力购买，经费足，买进口的，图个踏实。经费紧张买国产的，不会出大岔子的，我想你实验最重要的不是pcr，应该是后续工作，所以经费紧张得话takara和国产的都没问题。

[ Last edited by elvias on 2009-5-7 at 23:22 ]
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9楼2009-05-07 19:20:12
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)
很多高保真的酶所得到的产物末端没有A，加A要加Taq酶，我做得是50微升加0.5-1微升，跟平时做PCR加的量相同，72度30-60min。
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10楼2009-05-07 19:27:45
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