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深水鱼216

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】紫外可见分光光度的若干问题

以前没做过紫外可见分光光度的实验,理论和经验都没有。最近做了一下,发现诸多问题:
1  为什么会出现负的吸光度呢?基线调节时没问题啊。
2  同一种溶液,同样的比色皿,不一样的体积,但均达到了测量所需的最少体积,测得的吸光度有很大差别,为什么?
3  同一种溶液,不同的比色皿,为普通的透光宽度1cm 的和微量的透光宽度为1mm (光程均为1cm )的比色皿,测得的吸光度差别很大,为什么?

理论上讲不应该出现上述问题,但是实际我测了好多遍还是上述现象,恳请各位大侠讨论帮忙啊。谢谢啦!
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zzycyy

木虫 (著名写手)


深水鱼216(金币+1,VIP+0):谢谢啦!我再仔细做一下。 5-7 11:50
如果空白吸收很大,又可能,还有可能双光束比色杯对放反
是否充分摇匀,有没有悬浮物,如果峰位没变,把液体加到80%以上再试试
2楼2009-05-07 09:03:47
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kmd2005

木虫 (著名写手)

杀虫刹

★ ★
opq691(金币+2):很详细,感谢应助,欢迎常来分析版
1)参比比试样的吸收还强就会出现负值,但只要工作曲线好,不影响测试;
2)液量越少对测试准确度影响越大,包括对比色皿的洗涤不充分等因素,可以产生这种现象;
3)这个很正常,透光率明显不同,吸光度肯定不同,因为吸光度本身就是透光率的负对数关系。
天很蓝``
3楼2009-05-07 20:21:23
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davis_0411

木虫 (正式写手)


opq691(金币+1):感谢应助,欢迎常来分析版
1、出现负值,是空白吸收比样品吸收要强。
3、光程不一样,透光率自然不一样。
4楼2009-05-14 10:45:35
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