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[交流]
对羟基联苯比色法测乳酸含量的原理
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乳酸含量的测定，除高效液相、气相和离子色谱外，还有一种较为为常用且精确度很好的方法就是对羟基联苯比色法。由于实验室条件和样品量的关系，我最终确定用对羟基联苯比色法测乳酸。但是在整理具体分析方法的时候发现，不同文献中，所述实验原理和分析步骤有较大差别。现具体叙述，想和大家交流一下。 各文献所述 基本原理是：乳酸与浓硫酸共热被氧化为乙醛，然后乙醛与对羟基联苯发生显色反应，所呈颜色在w波长（565 nm，570 nm均有出现）下具有特征吸收峰，在一定范围内，乳酸含量与该峰处的吸光度呈线性关系。 但是反应期间有铜离子的催化作用，二其催化作用发挥在那个阶段，不同文献的表述不一。大部分中文文献中：乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与对羟基联苯作用生成在w波长 处有特征吸收的紫色物质；在一定浓度范围内，乳酸含量与w波长 处吸光度呈线性关系，因此可以通过测定w波长 处的吸光度来测定乳酸的含量。而在外文文献中，铜离子发挥催化作用是在乙醛与对羟基联苯间显色反应阶段（两篇：[1] barker s b, summerson w h. the colorimetric determination of lactic acid in biological material[j]. journal of biological chemistry, 1941, 138(2): 535-554.；[2] barnett a j. the colorimetric determination of lactic acid in silage[j]. biochemical journal, 1951, 49(4): 527-529.）。 另外，对于铜离子添加的时间：一种是在前面：加待测液后，加入4%（w/v）硫酸铜溶液，再加浓硫酸，再加对羟基联苯试剂进行显色；一种是在后面：加待测液，之后加浓硫酸，之后加4%（w/v）硫酸铜溶液，再加对羟基联苯试剂进行显色。到底哪个阶段前加铜离子，是在氧化乳酸成乙醛阶段前添加，还是氧化阶段后乙醛与对羟基联苯显色阶段前添加，还是只要在乙醛与对羟基联苯显色阶段前添加便可？ 所以，这里的问题就是：(1)铜离子发挥催化作用的阶段，是催化乳酸与浓硫酸反应生成乙醛，还是催化乙醛与对羟基联苯显色反应，还是对两种反应均有催化作用；(2)硫酸铜溶液添加时间，是在加入待测液之后便添加硫酸铜溶液，还是在乳酸与浓硫酸反应之后且加对羟基联苯显色之前添加。 欢迎大家参与讨论，提出宝贵建议。 谢谢。 |
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