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xmc9018

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取260/280>2 已有2人参与

用4ml菌液提质粒,浓度为803,260/280=2. 15,260/230= 2. 33。
请问一下260/280>2是什么原因啊

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在路上123666

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 热心应助,鼓励 2019-01-21 15:47:16
snoopytbw: 应助指数+1 2019-01-21 15:47:24
有蛋白在里面,没去净

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2楼2019-01-21 15:42:57
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xmc9018

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 在路上123666 at 2019-01-21 15:42:57
有蛋白在里面,没去净

那如果这个质粒要做酶切,一般是切多久呀?我37℃切30min,65℃5min,然后跑胶就几乎没有条带,测浓度也很低。新手,有点菜??

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3楼2019-01-21 18:49:07
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by xmc9018 at 2019-01-21 18:49:07
那如果这个质粒要做酶切,一般是切多久呀?我37℃切30min,65℃5min,然后跑胶就几乎没有条带,测浓度也很低。新手,有点菜??
...

酶切的时候加了多少质粒?我看你质粒浓度挺高的,酶切时间也不长,应该不至于切没了,应该是操作上或添加量上的问题~还有就是你65℃5min是做什么的?
···
4楼2019-01-22 09:40:19
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niyinluo

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.需要看你酶切片段的大小,大的话浓度是比较低的,但不会影响后续实验的
2.需要看你质粒与酶量的比例
5楼2019-01-22 10:59:38
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niyinluo

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2019-01-22 09:40:19
酶切的时候加了多少质粒?我看你质粒浓度挺高的,酶切时间也不长,应该不至于切没了,应该是操作上或添加量上的问题~还有就是你65℃5min是做什么的?...

65℃5min    失活 酶
6楼2019-01-22 11:00:21
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by niyinluo at 2019-01-22 11:00:21
65℃5min    失活 酶...

这一步没有必要吧,跑胶的buffer里就有终止酶反应的试剂
···
7楼2019-01-22 11:06:20
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niyinluo

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2019-01-22 11:06:20
这一步没有必要吧,跑胶的buffer里就有终止酶反应的试剂...

如果 不是立马就去跑胶的话。高温失活很必要的
8楼2019-01-22 15:39:42
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by niyinluo at 2019-01-22 15:39:42
如果 不是立马就去跑胶的话。高温失活很必要的...

这个也还好吧,一来你酶切时间很短,我们一般都切过夜,也是没有事情的,二来错误酶切的还是在少数,不会给你切散了,第三就是如果不立即跑胶,完全可以放冰箱里冻起来,酶活性自然就可以忽略了,不过65℃失活也完全ok了,个人操作问题
···
9楼2019-01-22 16:22:03
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