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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 质粒提取260/280＞2
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xmc9018

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取260/280＞2 已有2人参与

用4ml菌液提质粒，浓度为803，260/280=2. 15，260/230= 2. 33。
请问一下260/280＞2是什么原因啊

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1楼 2019-01-21 09:52:59
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在路上123666

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 热心应助，鼓励 2019-01-21 15:47:16
snoopytbw: 应助指数+1 2019-01-21 15:47:24
有蛋白在里面，没去净

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2楼2019-01-21 15:42:57
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xmc9018

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 在路上123666 at 2019-01-21 15:42:57
有蛋白在里面，没去净

那如果这个质粒要做酶切，一般是切多久呀？我37℃切30min，65℃5min，然后跑胶就几乎没有条带，测浓度也很低。新手，有点菜??

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3楼2019-01-21 18:49:07
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by xmc9018 at 2019-01-21 18:49:07
那如果这个质粒要做酶切，一般是切多久呀？我37℃切30min，65℃5min，然后跑胶就几乎没有条带，测浓度也很低。新手，有点菜??
...

酶切的时候加了多少质粒？我看你质粒浓度挺高的，酶切时间也不长，应该不至于切没了，应该是操作上或添加量上的问题~还有就是你65℃5min是做什么的？
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···
4楼2019-01-22 09:40:19
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niyinluo

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.需要看你酶切片段的大小，大的话浓度是比较低的，但不会影响后续实验的
2.需要看你质粒与酶量的比例
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5楼2019-01-22 10:59:38
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niyinluo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2019-01-22 09:40:19
酶切的时候加了多少质粒？我看你质粒浓度挺高的，酶切时间也不长，应该不至于切没了，应该是操作上或添加量上的问题~还有就是你65℃5min是做什么的？...

65℃5min    失活 酶
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6楼2019-01-22 11:00:21
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by niyinluo at 2019-01-22 11:00:21
65℃5min    失活 酶...

这一步没有必要吧，跑胶的buffer里就有终止酶反应的试剂
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7楼2019-01-22 11:06:20
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niyinluo

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2019-01-22 11:06:20
这一步没有必要吧，跑胶的buffer里就有终止酶反应的试剂...

如果 不是立马就去跑胶的话。高温失活很必要的
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8楼2019-01-22 15:39:42
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by niyinluo at 2019-01-22 15:39:42
如果 不是立马就去跑胶的话。高温失活很必要的...

这个也还好吧，一来你酶切时间很短，我们一般都切过夜，也是没有事情的，二来错误酶切的还是在少数，不会给你切散了，第三就是如果不立即跑胶，完全可以放冰箱里冻起来，酶活性自然就可以忽略了，不过65℃失活也完全ok了，个人操作问题
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···
9楼2019-01-22 16:22:03
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