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fengjunchen铜虫 (小有名气)
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[求助]
求帮忙分析分析融合蛋白不表达的原因 已有1人参与
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我最近在最两个蛋白的融合表达。一个是40多KD（后称A），一个是50多KD（后称B）。我之前分别做过这两个蛋白的表达，pET Rosetta的表达体系。 蛋白A在0.05mM的IPTG下就有较高表达，可溶和包涵体一半一半；蛋白B在1mM IPTG下游较高表达，几乎全是可溶的。 现在我把两个蛋白融合在了一起，还是在pET里，大概是 his6-B(无TAA)-A 这么个结构，按序列预测大概是95KD，1mM和2mM IPTG下诱导都看不到条带变化。 而且很恼人的一点是，Rosetta菌本身在大概95KD处有一个较浓的带，现在整的我也说不清是没表达，还是表达量太低了被原有的带直接给盖住了？这该怎么办呢？ 看起来像是不表达，这大概会是什么原因造成的呢？该尝试哪些改进呢？ |
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