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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 蛋白质标记荧光侵染细胞的技术问题
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kidd0115

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质标记荧光侵染细胞的技术问题

大家好，我想用Cy3-NHS标记一个蛋白质混合物刺激细胞观察其亚细胞定位。按照说明书做了，3kD超滤管离心了好几次，得到的蛋白浓度测量发现损失很大。然后和巨噬细胞共同孵育4h，拍荧光时候只看到dapi染的细胞核，看不到目的蛋白在细胞内发出荧光，而光学显微镜白光居然可以看到像染料沉淀一样肉眼可见的玫瑰色在细胞外面一大坨。想问下谁有经验可以分享？

或者详细告知阁下做过荧光标记蛋白的具体步骤，我看看我哪里做错？
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1楼 2019-01-18 11:08:36
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15737926255

银虫 (正式写手)
巨噬细胞压根没吞噬吧

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2楼2019-01-18 12:20:28
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kidd0115

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 15737926255 at 2019-01-18 12:20:28
巨噬细胞压根没吞噬吧

按说4个小时该吞噬的都会吞进去了吧，做墨汁试验不也是几个小时的事情么？

还有一个问题是超滤后为什么有沉淀的问题？
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3楼2019-01-19 10:22:49
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