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wmwman306

禁虫 (著名写手)

[交流] 删除

1）  3(上边的图)是以前跑的电泳，只有一条带
（2）(下边的图)是这段时间跑的电泳，怎么突然就出多条带呢？1的电泳还送去测序了，结果都测出来了？
（3）1和3都是同一个引物跑的，用其他的引物和其他的材料也是同样的结果。
   (4)    我把mg2+、dNTP、buffer、taq酶都换了。水做对照也是出同样的结果。

求教各位师长了。到底是哪方面出现问题呢？
我个人分析：
             (1) 0.5的TBE缓冲液出现问题。TBE缓冲液影响有这么大吗？
             (2)天气的影响，需要摸索条件。但是这个体系依然出带，提高退火温度只出一条带？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:14 ]
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1楼 2009-05-05 15:29:48
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smallcat227

木虫 (著名写手)
看不到图啊，还要钱的……
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2楼2009-05-05 15:46:45
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biozheng

木虫 (小有名气)
用的同一台PCR仪？？

建议重新摸索条件，提高特异性
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3楼2009-05-05 15:50:38
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
模板多了
酶多了
退火低了
引物本身就不大好
之类的都有可能
不过像这种杂带，完全可以通过跑2%的胶分开
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4楼2009-05-05 15:51:22
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wmwman306

禁虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by biozheng at 2009-5-5 15:50:
用的同一台PCR仪？？

建议重新摸索条件，提高特异性

恩，用的同一台PCR仪。可以前用很多体系都出的，我的目的只要出一条带就行，呵呵。
   这个问题确实很愁人啊。
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5楼2009-05-05 17:01:21
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wmwman306

禁虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-5-5 15:51:
模板多了
酶多了
退火低了
引物本身就不大好
之类的都有可能
不过像这种杂带，完全可以通过跑2%的胶分开

25ul体系：
     模板：约15ng
     Mg2+: 1.5mM
     dNTPs :0.2mM
     F、R引物各：0.32μmol/μl（10μ各加0.8μl）
    taqE：2U

应该不多啊，我之前用很高浓度的也出啊
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6楼2009-05-05 17:07:12
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jqq1985

银虫 (正式写手)
PCR仪的温度不准吧，你用的是一台机器p的吗？
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7楼2009-05-05 19:02:29
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hulqi

金虫 (正式写手)
做个TD-PCR，试试
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8楼2009-05-05 23:33:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
用1个单位的酶试试
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9楼2009-05-05 23:40:51
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wmwman306

禁虫 (著名写手)
恩，(1)做个梯度
       (2)减少酶量
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10楼2009-05-06 08:47:37
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