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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞如何在液氮中冻存
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o57933933

金虫 (正式写手)

[求助] 细胞如何在液氮中冻存 已有6人参与

有没有人可以给我详细的protocol，如何冻存细胞！在液氮里储存

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1楼 2019-01-08 13:53:51
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19950515lai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议步骤：4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃ 24h，然后就可以转移到液氮罐了。还有一种梯度冻存盒，盒子有夹层放异丙醇，可以直接放-80℃，然后一天后就可以放到液氮罐了。
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6楼2019-01-15 15:34:39
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芳荷恋雨

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

细胞冻存操作流程
操作流程
1.        准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射30min
2.        紫外照射后开风机吹10min，酒精擦拭台面，试剂和所需耗材喷酒精后放入
3.        配置冻存液，如DMEM:FBSMSO比例为7:2:1或5:4:1，也可选择全血清冻存液FBSMSO为9:1，将冻存液放入4℃冰箱预冷
4.        按照传代的方法消化细胞，离心，弃上清
5.        加入冻存液重悬细胞，按照1管1ml分装好后放入程序降温盒
6.        将程序降温盒放入-80℃冰箱，过夜后取出，将细胞转入液氮罐
注意事项
1.        若要计数，可在终止消化后取少量细胞悬液进行计数
2.        冻存液加入到细胞中后，最好半小时内将程序降温盒转移到-80℃
3.        转入液氮罐前，细胞至少要在-80℃放3h
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自己选的路，爬也要爬完
7楼2019-01-27 14:37:04
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普通回帖

xuelong920

新虫 (小有名气)
网上有详细的教程啊

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2楼2019-01-08 22:34:34
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w5e5f4

银虫 (正式写手)
慢冻速溶的方法  配冻存液血清：DMSO=1:9 ??打了一半不愿意打了

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3楼2019-01-09 08:06:20
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w5e5f4

银虫 (正式写手)
??先用冻存盒在-80℃ 放上24小时，说明书然后取出来 投入液氮

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4楼2019-01-09 08:07:49
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503276866

金虫 (小有名气)
慢冻快溶
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没有最好只有更好
5楼2019-01-10 13:12:02
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
8楼2019-02-10 16:34:44
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龙猫测

木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

慢冻速溶的方法  配冻存液血清：DMSO=1:9 ,呵呵，我也不想打字了，发个邮箱给我，我发个教程给你吧，包括培养等的注意事项的都有
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9楼2019-02-12 11:59:56
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Lily珊瑚虫

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你是什么细胞啊？有时细胞不同，使用的冻存液会有差别。细胞比较脆弱的话，需要使用培养细胞的旧培养基与新鲜培养基1:1混合，在调整胎牛血清浓度，一般为20%;分装前加入DMSO，一般使用浓度8%。分装后可采用慢冻法：4度 30min;-20度 30min;-80度过夜；第二天转入液氮罐中保存。或直接使用冻存盒后再装入液氮罐中。
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Lily
10楼2019-03-01 14:34:26
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