24小时热门版块排行榜    

查看: 4347  |  回复: 7

Greg117

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌种保存和质粒提取 已有1人参与

1、抗性平板上挑选的克隆单菌落,在5ml液体lb(需要添加相应抗生素吗?)培养多久能用来做甘油菌保存?
2、为什么提取出来的质粒浓度很低,只有50ng/微升左右?后续要做表达载体构建,浓度多少才合适呢?
步骤:从抗性平板上挑一个菌落接种到5mlLB(未加抗生素,需要加吗?),培养16h取3ml用碧云天的小量抽提试剂盒提取,用50微升洗脱液储存。
希望做过的前辈能帮我解答一下疑问,谢谢大家了。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想要读博

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
Greg117(渊博震天代发): 金币+5, 鼓励积极回帖 2019-01-04 15:34:56
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

发自小木虫Android客户端
你若盛开,清风自来
2楼2019-01-04 14:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想要读博

铜虫 (正式写手)

提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你若盛开,清风自来
3楼2019-01-04 14:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Greg117

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:53:28
提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况
...

好的,谢谢您

发自小木虫Android客户端
4楼2019-01-04 14:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizimu566

木虫 (正式写手)

提质粒多离心些菌液,质粒浓度就上来了
5楼2019-01-04 16:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:50:20
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

50%甘油?认真的吗?
6楼2019-01-08 10:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励经验交流 2019-01-09 13:23:47
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养时间或者增加富集菌液的量就行了。
3. 刚开始做有不会的很正常 慢慢来,加油!
7楼2019-01-08 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Greg117

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-01-08 10:29:27
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养 ...

谢谢您的解答

发自小木虫Android客户端
8楼2019-01-08 17:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Greg117 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考博] 2026博士申请 +7 起泡酒 2026-03-08 7/350 2026-03-13 09:56 by mumu真真
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-12 8/400 2026-03-13 09:25 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 超级伊昂大王 2026-03-12 3/150 2026-03-12 15:49 by peike
[考研] 2026考研求调剂-材料类-本科211一志愿985-初试301分 +10 虫友233 2026-03-07 11/550 2026-03-12 14:52 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿天津大学材料与化工275求调剂 10+5 穿只靴子 2026-03-07 22/1100 2026-03-11 21:11 by kiokin
[考研] 求调剂 +5 yfihxh 2026-03-09 5/250 2026-03-11 18:35 by 18137688336
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 环境调剂 +5 晓看天暮看云 2026-03-09 5/250 2026-03-10 10:46 by 星空星月
[硕博家园] 木虫好像不热闹了,是不是? +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
[考研] 一志愿山东大学,总分327,英语二79,有论文,有竞赛,已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
[考研] 0703化学求调剂,总分309分,一志愿华南师范 +3 花与叶@ 2026-03-08 3/150 2026-03-09 05:48 by houyaoxu
[考研] 一志愿武理314求调剂 +4 ( ̄~ ̄;) 2026-03-08 5/250 2026-03-08 23:12 by L135790
[考研] 085701环境工程317分求调剂 +9 6汆尼9 2026-03-07 9/450 2026-03-08 06:41 by 刘兵
[考研] 材料科学(0805)338 求调剂 +7 xiaokang3286 2026-03-07 7/350 2026-03-08 03:42 by lfhuang
[考研] 276求调剂 本科天津工业大学 一志愿北京化工大学0855 +4 路lyh123 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:37 by shdliugang
信息提示
请填处理意见