24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4461  |  回复: 7

Greg117

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌种保存和质粒提取 已有1人参与

1、抗性平板上挑选的克隆单菌落,在5ml液体lb(需要添加相应抗生素吗?)培养多久能用来做甘油菌保存?
2、为什么提取出来的质粒浓度很低,只有50ng/微升左右?后续要做表达载体构建,浓度多少才合适呢?
步骤:从抗性平板上挑一个菌落接种到5mlLB(未加抗生素,需要加吗?),培养16h取3ml用碧云天的小量抽提试剂盒提取,用50微升洗脱液储存。
希望做过的前辈能帮我解答一下疑问,谢谢大家了。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想要读博

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
Greg117(渊博震天代发): 金币+5, 鼓励积极回帖 2019-01-04 15:34:56
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

发自小木虫Android客户端
你若盛开,清风自来
2楼2019-01-04 14:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想要读博

铜虫 (正式写手)

提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你若盛开,清风自来
3楼2019-01-04 14:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Greg117

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:53:28
提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况
...

好的,谢谢您

发自小木虫Android客户端
4楼2019-01-04 14:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lizimu566

木虫 (正式写手)

提质粒多离心些菌液,质粒浓度就上来了
5楼2019-01-04 16:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:50:20
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

50%甘油?认真的吗?
6楼2019-01-08 10:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励经验交流 2019-01-09 13:23:47
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养时间或者增加富集菌液的量就行了。
3. 刚开始做有不会的很正常 慢慢来,加油!
7楼2019-01-08 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Greg117

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-01-08 10:29:27
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养 ...

谢谢您的解答

发自小木虫Android客户端
8楼2019-01-08 17:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Greg117 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 别被青基扩招骗了!26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 找博士生导师 +5 小代想上岸 2026-05-15 6/300 2026-05-19 08:28 by zhyzzh
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +10 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 10/500 2026-05-19 08:05 by 六两废铜
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +16 国自然国社科中 2026-05-17 16/800 2026-05-18 14:58 by gy116024
[硕博家园] 考博自荐 +5 科研狗111 2026-05-13 6/300 2026-05-18 11:22 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 xx7gd5zq4e 2026-05-15 6/300 2026-05-17 19:36 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:11 by 11n4dfd8yn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cjf4bx70cj 2026-05-14 7/350 2026-05-17 06:55 by 11n4dfd8yn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k37jurhrau 2026-05-16 4/200 2026-05-17 01:35 by ue3ir18jc3
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ky2p12rrjj 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:57 by ue3ir18jc3
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ky2p12rrjj 2026-05-15 3/150 2026-05-17 00:45 by ue3ir18jc3
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:25 by ue3ir18jc3
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-16 17:45 by j6b2pdz07o
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯(CAS:2793408-99-6)的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
请填处理意见