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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌种保存和质粒提取
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Greg117

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌种保存和质粒提取 已有1人参与

1、抗性平板上挑选的克隆单菌落，在5ml液体lb（需要添加相应抗生素吗？）培养多久能用来做甘油菌保存？
2、为什么提取出来的质粒浓度很低，只有50ng/微升左右？后续要做表达载体构建，浓度多少才合适呢？
步骤:从抗性平板上挑一个菌落接种到5mlLB（未加抗生素，需要加吗？），培养16h取3ml用碧云天的小量抽提试剂盒提取，用50微升洗脱液储存。
希望做过的前辈能帮我解答一下疑问，谢谢大家了。

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1楼 2019-01-04 13:48:48
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想要读博

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
Greg117(渊博震天代发): 金币+5, 鼓励积极回帖 2019-01-04 15:34:56
菌种保存用百分之五十的甘油，负80℃保存，一个菌保存两份，分不同冰箱保存，防止其中一个冰箱坏了，标本不能用，

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你若盛开，清风自来
2楼2019-01-04 14:50:20
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想要读博

铜虫 (正式写手)
提取质粒浓度低说明你操作过程有问题，有污染，按操作我们提的都200多纳克每微升，还有这些东西你完全可以百度找到，百度还是挺强大的，多找找自己综合一下就知道大概情况

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Greg117
你若盛开，清风自来
3楼2019-01-04 14:53:28
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Greg117

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:53:28
提取质粒浓度低说明你操作过程有问题，有污染，按操作我们提的都200多纳克每微升，还有这些东西你完全可以百度找到，百度还是挺强大的，多找找自己综合一下就知道大概情况
...

好的，谢谢您

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4楼2019-01-04 14:55:03
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lizimu566

木虫 (正式写手)
提质粒多离心些菌液，质粒浓度就上来了
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5楼2019-01-04 16:59:00
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:50:20
菌种保存用百分之五十的甘油，负80℃保存，一个菌保存两份，分不同冰箱保存，防止其中一个冰箱坏了，标本不能用，

50%甘油？认真的吗？
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6楼2019-01-08 10:24:15
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励经验交流 2019-01-09 13:23:47
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇，菌体浑浊后，菌液与50%甘油（水和甘油1：1混匀后高压蒸汽灭菌）1：1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短（一般12-16h);质粒拷贝数比较低；一般延长培养时间或者增加富集菌液的量就行了。
3. 刚开始做有不会的很正常 慢慢来，加油！
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7楼2019-01-08 10:29:27
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Greg117

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-01-08 10:29:27
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇，菌体浑浊后，菌液与50%甘油（水和甘油1：1混匀后高压蒸汽灭菌）1：1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短（一般12-16h);质粒拷贝数比较低；一般延长培养 ...

谢谢您的解答

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8楼2019-01-08 17:59:40
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