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Greg117

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌种保存和质粒提取 已有1人参与

1、抗性平板上挑选的克隆单菌落,在5ml液体lb(需要添加相应抗生素吗?)培养多久能用来做甘油菌保存?
2、为什么提取出来的质粒浓度很低,只有50ng/微升左右?后续要做表达载体构建,浓度多少才合适呢?
步骤:从抗性平板上挑一个菌落接种到5mlLB(未加抗生素,需要加吗?),培养16h取3ml用碧云天的小量抽提试剂盒提取,用50微升洗脱液储存。
希望做过的前辈能帮我解答一下疑问,谢谢大家了。

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想要读博

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
Greg117(渊博震天代发): 金币+5, 鼓励积极回帖 2019-01-04 15:34:56
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

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你若盛开,清风自来
2楼2019-01-04 14:50:20
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想要读博

铜虫 (正式写手)

提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你若盛开,清风自来
3楼2019-01-04 14:53:28
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Greg117

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:53:28
提取质粒浓度低说明你操作过程有问题,有污染,按操作我们提的都200多纳克每微升,还有这些东西你完全可以百度找到,百度还是挺强大的,多找找自己综合一下就知道大概情况
...

好的,谢谢您

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4楼2019-01-04 14:55:03
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lizimu566

木虫 (正式写手)

提质粒多离心些菌液,质粒浓度就上来了
5楼2019-01-04 16:59:00
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 想要读博 at 2019-01-04 14:50:20
菌种保存用百分之五十的甘油,负80℃保存,一个菌保存两份,分不同冰箱保存,防止其中一个冰箱坏了,标本不能用,

50%甘油?认真的吗?
6楼2019-01-08 10:24:15
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
渊博震天: 金币+2, 鼓励经验交流 2019-01-09 13:23:47
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养时间或者增加富集菌液的量就行了。
3. 刚开始做有不会的很正常 慢慢来,加油!
7楼2019-01-08 10:29:27
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Greg117

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Esther_Young at 2019-01-08 10:29:27
1. 要加抗生素。加了抗生素后过夜小摇,菌体浑浊后,菌液与50%甘油(水和甘油1:1混匀后高压蒸汽灭菌)1:1比例混合均匀后-80冻存。
2. 可能的原因有菌液培养时间过短(一般12-16h);质粒拷贝数比较低;一般延长培养 ...

谢谢您的解答

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8楼2019-01-08 17:59:40
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