应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 带双酶切位点的PCR产物需要先测序 在连接到表达载体，是否必须是 simple T 载体？
61/1返回列表
查看: 704  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xhlxhl

木虫 (正式写手)

[交流] 带双酶切位点的PCR产物需要先测序 在连接到表达载体，是否必须是 simple T 载体？

如题~ 如果 直接连 普通T载体，再切下来的时候问题大么？

[ Last edited by xhlxhl on 2009-5-3 at 23:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-03 23:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
表达载体同样可以拿去测序
连了T再切也是可以的
赞一下 回复此楼
2楼2009-05-03 23:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaolef4s

金虫 (正式写手)
★
xhlxhl(金币+1,VIP+0):感谢指点，多谢多谢 5-5 00:36
PCR后，直接酶切，连接表达载体测序，速度快，还节省经费。最好不要连接T载体，它上面的各种酶切位点很容易在酶切时给你带来如移码突变之类的问题。测序一看，序列对了，可是用不了，因为酶切在T载体上，而不是你的基因处。
赞一下 回复此楼
这一切都会过去！
3楼2009-05-04 10:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20021239

银虫 (小有名气)
同意楼上的观点，我现在就是这么做的
赞一下 回复此楼
http://www.jove.com/index/main.stp
4楼2009-05-04 23:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjg_1979

木虫 (小有名气)
表达载体的酶切位点在你设计引物扩增时就要考虑了，表达载体的酶切位点和你所得到的产物（切胶产物的）的酶切位应是一致的，这样就可能直接连上，如果不是这样，象加有Ｔ的可能会产生移码，你就有可能会表达不出来，或者是错误的表达！
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-05 00:11:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
直接用你的表达载体好了。一般的表达载体，测序公司都有通用测序引物，不需要自己设计的。
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-05 19:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xhlxhl 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 7/350 2026-08-17 16:11 by Vivilian
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭