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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 带双酶切位点的PCR产物需要先测序 在连接到表达载体，是否必须是 simple T 载体？
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

[交流] 带双酶切位点的PCR产物需要先测序 在连接到表达载体，是否必须是 simple T 载体？

如题~ 如果 直接连 普通T载体，再切下来的时候问题大么？

[ Last edited by xhlxhl on 2009-5-3 at 23:47 ]
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1楼 2009-05-03 23:30:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
表达载体同样可以拿去测序
连了T再切也是可以的
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2楼2009-05-03 23:35:17
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gaolef4s

金虫 (正式写手)
★
xhlxhl(金币+1,VIP+0):感谢指点，多谢多谢 5-5 00:36
PCR后，直接酶切，连接表达载体测序，速度快，还节省经费。最好不要连接T载体，它上面的各种酶切位点很容易在酶切时给你带来如移码突变之类的问题。测序一看，序列对了，可是用不了，因为酶切在T载体上，而不是你的基因处。
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这一切都会过去！
3楼2009-05-04 10:10:58
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20021239

银虫 (小有名气)
同意楼上的观点，我现在就是这么做的
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http://www.jove.com/index/main.stp
4楼2009-05-04 23:29:58
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wjg_1979

木虫 (小有名气)
表达载体的酶切位点在你设计引物扩增时就要考虑了，表达载体的酶切位点和你所得到的产物（切胶产物的）的酶切位应是一致的，这样就可能直接连上，如果不是这样，象加有Ｔ的可能会产生移码，你就有可能会表达不出来，或者是错误的表达！
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5楼2009-05-05 00:11:52
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jqq1985

银虫 (正式写手)
直接用你的表达载体好了。一般的表达载体，测序公司都有通用测序引物，不需要自己设计的。
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6楼2009-05-05 19:14:27
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