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kwkw

木虫 (著名写手)

[交流] 求助T4连接问题?

近来用NEB的T4 DNA ligase 将Mse I 和PstI双酶切产物与Mse I 和PstI的接头(均5端磷酸化)连接,几次做琼脂糖电泳都在100bp以下有很亮的带,请问高手这是什么原因?是接头自连吗?如何避免?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:10 ]
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

只有这里有带别处没有吗?
做转化结果又如何呢?
我连接产物从来不检测,转化后看结果。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2009-05-02 18:07:01
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

是连接产物直接取一点做电泳检测吗?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2009-05-02 12:30:24
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kwkw

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2009-5-2 12:30:
是连接产物直接取一点做电泳检测吗?

是直接取连接产物进行电泳。
再苦:也别忘记坚持!再烦:也别忘记微笑!再急:也要注意语气!再累:也要爱自己!低调做人,你会一次比一次稳健。高调做事,你会一次比一次优秀!
3楼2009-05-02 13:43:48
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anik

银虫 (正式写手)

对的,连接后直接转化,看转化的效果,挑选阳性阳性克隆就行了
5楼2009-05-02 20:30:15
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