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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助T4连接问题？
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kwkw

木虫 (著名写手)

[交流] 求助T4连接问题？

近来用NEB的T4　DNA　ligase 将Mse I 和PstI双酶切产物与Mse I 和PstI的接头（均5端磷酸化）连接，几次做琼脂糖电泳都在100bp以下有很亮的带，请问高手这是什么原因？是接头自连吗？如何避免？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:10 ]
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再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
1楼 2009-05-01 22:04:44
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
是连接产物直接取一点做电泳检测吗？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2009-05-02 12:30:24
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kwkw

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2009-5-2 12:30:
是连接产物直接取一点做电泳检测吗？

是直接取连接产物进行电泳。
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再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
3楼2009-05-02 13:43:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
只有这里有带别处没有吗？
做转化结果又如何呢？
我连接产物从来不检测，转化后看结果。
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
4楼2009-05-02 18:07:01
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anik

银虫 (正式写手)
对的，连接后直接转化，看转化的效果，挑选阳性阳性克隆就行了
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5楼2009-05-02 20:30:15
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breezemail

金虫 (小有名气)
支持楼上的，我也是做完转化再鉴定。
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6楼2009-05-09 18:26:39
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hiking8715

金虫 (小有名气)
支持楼上和楼上的楼上。转化后挑阳性克隆，P菌液就可以，或直接菌落PCR
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7楼2009-05-10 01:54:50
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nova6298

银虫 (小有名气)
若想消除自连可去磷酸化
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8楼2009-05-18 11:30:18
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