应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助T4连接问题？
81/1返回列表
查看: 590  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

kwkw

木虫 (著名写手)

[交流] 求助T4连接问题？

近来用NEB的T4　DNA　ligase 将Mse I 和PstI双酶切产物与Mse I 和PstI的接头（均5端磷酸化）连接，几次做琼脂糖电泳都在100bp以下有很亮的带，请问高手这是什么原因？是接头自连吗？如何避免？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:10 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
1楼 2009-05-01 22:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
是连接产物直接取一点做电泳检测吗？
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2009-05-02 12:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kwkw

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2009-5-2 12:30:
是连接产物直接取一点做电泳检测吗？

是直接取连接产物进行电泳。
赞一下 回复此楼
再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
3楼2009-05-02 13:43:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
只有这里有带别处没有吗？
做转化结果又如何呢？
我连接产物从来不检测，转化后看结果。
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
4楼2009-05-02 18:07:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
对的，连接后直接转化，看转化的效果，挑选阳性阳性克隆就行了
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-02 20:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

breezemail

金虫 (小有名气)
支持楼上的，我也是做完转化再鉴定。
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-09 18:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hiking8715

金虫 (小有名气)
支持楼上和楼上的楼上。转化后挑阳性克隆，P菌液就可以，或直接菌落PCR
赞一下 回复此楼
7楼2009-05-10 01:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nova6298

银虫 (小有名气)
若想消除自连可去磷酸化
赞一下 回复此楼
8楼2009-05-18 11:30:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kwkw 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 5/250 2026-03-26 09:01 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料求调剂 +4 .m.. 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:30 by peike
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭