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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » CRISPR Cas9双质粒系统中pTarget质粒的消除
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Timy123

新虫 (初入文坛)

[交流] CRISPR Cas9双质粒系统中pTarget质粒的消除 已有5人参与

我用IPTG诱导含有双质粒的菌，长起来之后划线，再挑菌验证，结果接到K和Sp抗性的试管都长了，按理来说消除掉pTarget的菌不应该在sp抗性的试管里生长了，有消除这个质粒经验的大神吗？谢谢

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1楼 2018-12-23 19:33:56
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匿名

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6楼2019-10-10 19:20:51
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粽子君

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6楼: Originally posted by 小木无虫 at 2019-10-10 19:20:51
很好消的，我做的基本都是很容易就消除了

我敲第一个基因也是很好就消除了，但是敲第二个基因的时候，尝试了不同浓度的IPTG诱导，传代4次，都不能消除pTarget，请问你可以详细说说是怎么消除的吗？谢谢啦～～～
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7楼2019-10-23 10:12:50
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粽子君

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8楼: Originally posted by 小木无虫 at 2019-10-23 11:59:12
诱导之后划线单克隆，挑选消除的单克隆
...

我也是啊，但是挑出来的全都能在Spe抗性上长出来，说明没消除掉，是我挑的不够多吗
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9楼2019-10-23 12:13:59
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biosci

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多传代几次，才能把质粒彻底消除

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2楼2018-12-23 22:32:56
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Timy123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-12-23 22:32:56
多传代几次，才能把质粒彻底消除

谢谢～

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3楼2018-12-27 21:48:12
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JM109

新虫 (初入文坛)
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楼主好，我也在做这个，想问下你第二个质粒是用何种方法转化到宿主的

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4楼2019-01-05 12:33:37
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粽子君

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3楼: Originally posted by Timy123 at 2018-12-27 21:48:12
谢谢～
...

楼主，你好，我也遇到这个问题，请问你最后是怎么解决的？
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5楼2019-10-10 09:58:07
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匿名

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8楼2019-10-23 11:59:12
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匿名

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粽子君
10楼2019-10-23 12:15:34
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