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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助目标片段双酶切检验问题
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趁小早

新虫 (小有名气)

[求助] 求助目标片段双酶切检验问题 已有1人参与

本人现需要做目标片段双酶切，需要从目标片段上切下来保护碱基，一共就4bp。我的问题就是双酶切之前与双酶切之后差异这么小是如何检验目的片段是否双酶切完全。谢谢各位大神@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2018-12-19 19:47:49
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趁小早

新虫 (小有名气)
谢谢大家，自顶一下
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2楼2018-12-19 19:48:41
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rohdy

新虫 (著名写手)
4bp咋切？你切这个的目的是什么，难道不是切目的片段以检测载体构建成功？

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趁小早
3楼2018-12-19 20:59:30
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zw破风

金虫 (正式写手)
这么短还切个毛啊，直接合成得了……

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趁小早
4楼2018-12-19 21:45:29
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lizimu566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
趁小早(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-12-24 12:41:09
不用检验，酶切后回收后，直接连接就可以，肯定有切下来的片段
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趁小早
5楼2018-12-20 09:02:50
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趁小早

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by lizimu566 at 2018-12-20 09:02:50
不用检验，酶切后回收后，直接连接就可以，肯定有切下来的片段

谢谢您的回答，我切下来的是保护碱基，老师说不切保护碱基的话怕后期链接不上，我不知道用什么理由来反驳他，您能具体解释一下吗？

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6楼2018-12-22 22:09:21
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趁小早

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by rohdy at 2018-12-19 20:59:30
4bp咋切？你切这个的目的是什么，难道不是切目的片段以检测载体构建成功？

谢谢您的回答，我切下来的是保护碱基，老师说不切保护碱基的话怕后期链接不上，进而进行载体构建，是不是4bp有些记不清了，最多不超过10bp，我不知道用什么理由来反驳他，您能具体解释一下吗？

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7楼2018-12-22 22:10:50
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趁小早

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by zw破风 at 2018-12-19 21:45:29
这么短还切个毛啊，直接合成得了……

你说的合成是什么意思呀？我的目标片段大小已经达到300bp了

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8楼2018-12-22 22:12:01
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lizimu566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 趁小早 at 2018-12-22 22:09:21
谢谢您的回答，我切下来的是保护碱基，老师说不切保护碱基的话怕后期链接不上，我不知道用什么理由来反驳他，您能具体解释一下吗？
...

保护碱基肯定要切掉，酶切后回收在做连接就好了
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9楼2018-12-24 09:55:19
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草哥cium

新虫 (正式写手)
★
趁小早(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-12-24 12:41:34
不用检验，你要检验就去先连接克隆载体，再去酶切

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10楼2018-12-24 10:00:22
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