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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 多重引物PCR问题
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LIFERESET

新虫 (初入文坛)

[交流] 多重引物PCR问题 已有9人参与

想问一下，我现在正在做多重引物PCR，是将100多条引物放到一个体系内
然后就出现了扩增抑制，除了删除部分引物以外，还有没有啥其他方法可以尽可能的减弱扩增抑制情况呢？
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王二妮good

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1楼 2018-12-14 15:16:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

makira

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一个反应体系内放入100多条引物？真的假的啊。引物之间互相干扰，能扩增出来才怪
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4楼2018-12-15 23:06:41
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-12-18 09:37:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by makira at 2018-12-15 23:06:41
一个反应体系内放入100多条引物？真的假的啊。引物之间互相干扰，能扩增出来才怪

100来条引物都不算多的，Qiagen用多重PCR做基因Panel的上千条引物都有。楼主可以看看Qiagen的产品，有专门做多重的试剂盒，或许有帮助。
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2019更好更棒!
5楼2018-12-16 14:13:20
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-12-18 09:36:56
浓度要合理，引物最终浓度要跟普通PCR差不多
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-12-14 23:36:28
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makira

铜虫 (初入文坛)
★
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6楼2018-12-16 19:49:58
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海风_Spume

新虫 (小有名气)
★
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6楼: Originally posted by makira at 2018-12-16 19:49:58
涨知识了！小弟无知，只知道普通多重pcr。原来还有这种生物技术，让你见笑了！谢谢大神指点。这么多引物逐个加入体系中，要花好几天吧？...

多重引物设计100对引物几个小时就能搞定

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范公子
液相探针/多重引物设计，欢迎交流经验
7楼2018-12-17 13:43:20
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海风_Spume

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，引物二聚体，特异性是否好？

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液相探针/多重引物设计，欢迎交流经验
8楼2018-12-17 13:45:22
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普通回帖

LIFERESET

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-12-14 23:36:28
浓度要合理，引物最终浓度要跟普通PCR差不多

我试过了，PCR的体系目前已经固定在100uL了，然后引物终浓度最高也就0.6uM，还是不行，我真的是没办法了.....
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3楼2018-12-15 12:29:09
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范公子

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 海风_Spume at 2018-12-17 13:43:20
多重引物设计100对引物几个小时就能搞定
...

请问用啥软件设计的？

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9楼2019-05-16 21:06:37
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王二妮good

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
请问楼主现在解决这个问题了吗？Thermo life公司在引物设计时加上了一种化学修饰，IDT公司也是加了修饰，请问楼主知不知道引物怎样修饰能减少引物之间的相互作用和引物二聚体的形成呢？
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越努力越幸运~
10楼2019-08-02 16:49:24
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