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sduftq新虫 (初入文坛)
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[求助]
[求助] 质粒转染，gfp有荧光，western无目的条带。撒金币求助！！
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质粒转染后GFP标签有荧光，但是western检测不到目的条带。 想做某分泌型抗体，构建真核表达质粒（构建了多种，载体有PCDNA3.1-FLAG,PCDNA3,1-his,pdsred-GFP），将GFP加到目的片段后面，转染后可以看到 绿色荧光，然后收集培养皿中上培养基，收集细胞裂解物。但是Western始终检测不到目的蛋白。并且每次做出的错误结果都不同，条带位置乱七八糟。 1.载体用过pdsred，PCDNA3.1，cscw2-400-18Q, 2.标签用过：his，flag，gfp。 3.转染试剂：PEI, Lip2000 4.转染的皿：6孔板， 6cm，10cm 5.细胞：293T，HELA 备注：用的his，flag，gfp抗体没问题。 实在想不出有别的什么问题了，希望有人能帮我分析一下，谢谢~ @youlinglyw |
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