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5......123

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子克隆,连接产物检测?已有1人参与

分子克隆中连接产物如何检测是否连接成功?

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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还有谁!

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
5......123(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-01 10:40:46
可以提质粒,酶切验证;最靠谱就是测序验证,拿载体上通用引物。

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2楼2018-12-11 19:54:28
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danding~hr

新虫 (正式写手)

★ ★
5......123(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-01 10:41:02
先菌液PCR验证,阳性可以送去测序再验证下,也可以提质粒酶切做验证

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3楼2018-12-11 20:03:23
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 还有谁! at 2018-12-11 19:54:28
可以提质粒,酶切验证;最靠谱就是测序验证,拿载体上通用引物。



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4楼2018-12-11 20:08:57
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5......123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by danding~hr at 2018-12-11 20:03:23
先菌液PCR验证,阳性可以送去测序再验证下,也可以提质粒酶切做验证

就是一直都做不出阳性克隆换了buffer,载体,都不行,。

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5楼2019-02-28 23:02:49
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

层层递进 避免出错 1.菌落pcr 2. 摇菌提质粒 质粒PCR,酶切验证 3. 质粒测序验证

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6楼2019-03-03 02:12:40
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)

1. 确定目的基因和载体都成功切开并跑胶检测回收质量 2.连接(在冰上操作)16度12-16小时 3.目的基因和载体比例为1:6  我这样做没有失败过

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7楼2019-03-03 02:15:05
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