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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 分子克隆，连接产物检测？
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5......123

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子克隆，连接产物检测？ 已有1人参与

分子克隆中连接产物如何检测是否连接成功？

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-12-11 19:41:34
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还有谁！

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
5......123(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-01 10:40:46
可以提质粒，酶切验证；最靠谱就是测序验证，拿载体上通用引物。

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2楼2018-12-11 19:54:28
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danding~hr

新虫 (正式写手)
★ ★
5......123(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-03-01 10:41:02
先菌液PCR验证，阳性可以送去测序再验证下，也可以提质粒酶切做验证

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3楼2018-12-11 20:03:23
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xinxinjin
引用回帖:
2楼: Originally posted by 还有谁！ at 2018-12-11 19:54:28
可以提质粒，酶切验证；最靠谱就是测序验证，拿载体上通用引物。

对

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4楼2018-12-11 20:08:57
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5......123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by danding~hr at 2018-12-11 20:03:23
先菌液PCR验证，阳性可以送去测序再验证下，也可以提质粒酶切做验证

就是一直都做不出阳性克隆换了buffer,载体，都不行，。

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5楼2019-02-28 23:02:49
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)
层层递进 避免出错 1.菌落pcr 2. 摇菌提质粒 质粒PCR，酶切验证 3. 质粒测序验证

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6楼2019-03-03 02:12:40
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)
1. 确定目的基因和载体都成功切开并跑胶检测回收质量 2.连接（在冰上操作）16度12-16小时 3.目的基因和载体比例为1:6  我这样做没有失败过

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7楼2019-03-03 02:15:05
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