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wx0614

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神指导 已有3人参与

我的重组质粒转化之后挑取单克隆菌株，PCr检测可以p出插入片段条带，但是提完质粒之后在做酶切检测就只剩下载体条带了，这是怎么回事呢？酶（xho1+nde1）载体大概5k，片段1k

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1楼 2018-12-10 09:07:58
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xinxinjin

银虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切之后，没有目的条带 是吧

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2楼2018-12-10 10:31:14
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wx0614

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinxinjin at 2018-12-10 10:31:14
酶切之后，没有目的条带 是吧

是呢

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3楼2018-12-10 14:44:55
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nicegreat

新虫 (小有名气)
★
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你是直接用培养基上的单克隆PCR的吧？你的平板上有你的片段，你所谓能p出来其实是以你的片段为模板。所以你的片段可能根本就没连上载体。

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4楼2018-12-10 16:40:41
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nicegreat

新虫 (小有名气)
可以在载体上设计一条引物，另一条用你的基因引物，一般p出来就没问题

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5楼2018-12-10 16:42:39
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1034714749

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.使用载体的通用引物再p,这样才准确一点
2.能p出来也代表挑取的菌落里有片段，确认是否是单克隆菌落
3.酶切验证用单双酶切同时做，单酶切是6k，双酶切只发现载体片段可能只是浓度低
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6楼2018-12-10 16:52:37
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