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wx0614

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神指导 已有3人参与

我的重组质粒转化之后挑取单克隆菌株,PCr检测可以p出插入片段条带,但是提完质粒之后在做酶切检测就只剩下载体条带了,这是怎么回事呢?酶(xho1+nde1)载体大概5k,片段1k

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xinxinjin

银虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切之后,没有目的条带 是吧

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2楼2018-12-10 10:31:14
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wx0614

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xinxinjin at 2018-12-10 10:31:14
酶切之后,没有目的条带 是吧

是呢

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3楼2018-12-10 14:44:55
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nicegreat

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是直接用培养基上的单克隆PCR的吧?你的平板上有你的片段,你所谓能p出来其实是以你的片段为模板。所以你的片段可能根本就没连上载体。

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4楼2018-12-10 16:40:41
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nicegreat

新虫 (小有名气)

可以在载体上设计一条引物,另一条用你的基因引物,一般p出来就没问题

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5楼2018-12-10 16:42:39
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1034714749

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.使用载体的通用引物再p,这样才准确一点
2.能p出来也代表挑取的菌落里有片段,确认是否是单克隆菌落
3.酶切验证用单双酶切同时做,单酶切是6k,双酶切只发现载体片段可能只是浓度低
6楼2018-12-10 16:52:37
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