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我的重组质粒转化之后挑取单克隆菌株,PCr检测可以p出插入片段条带,但是提完质粒之后在做酶切检测就只剩下载体条带了,这是怎么回事呢?酶(xho1+nde1)载体大概5k,片段1k
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xinxinjin
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酶切之后,没有目的条带 是吧
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2楼
2018-12-10 10:31:14
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2楼
:
Originally posted by
xinxinjin
at 2018-12-10 10:31:14
酶切之后,没有目的条带 是吧
是呢
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3楼
2018-12-10 14:44:55
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你是直接用培养基上的单克隆PCR的吧?你的平板上有你的片段,你所谓能p出来其实是以你的片段为模板。所以你的片段可能根本就没连上载体。
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4楼
2018-12-10 16:40:41
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可以在载体上设计一条引物,另一条用你的基因引物,一般p出来就没问题
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5楼
2018-12-10 16:42:39
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1.使用载体的通用引物再p,这样才准确一点
2.能p出来也代表挑取的菌落里有片段,确认是否是单克隆菌落
3.酶切验证用单双酶切同时做,单酶切是6k,双酶切只发现载体片段可能只是浓度低
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6楼
2018-12-10 16:52:37
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