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a皑雪c

银虫 (正式写手)

[交流] 全血样品加酸之后怎么完全沉淀

做的是生物分析,测定全血中某一个药物的含量,但是用甲醇沉淀提取回收率几乎为零,现在试出来是沉淀剂加酸,回收率达到100,但是酸化后全血并不能完全沉淀掉,取出来的上清是糊状的,放置十几分钟就不会流动了。有没有什么办法可以将全血完全沉淀掉呢,多谢了!

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a皑雪c

银虫 (正式写手)

2楼2018-12-03 12:21:23
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不才ulin

新虫 (著名写手)


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用乙腈加酸沉淀试过么

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额。。。。
3楼2018-12-03 21:41:07
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a皑雪c

银虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by 不才ulin at 2018-12-03 21:41:07
用乙腈加酸沉淀试过么

没有,因为是个多肽,刚开始沉淀血浆,直接用甲醇,怕乙腈直接把多肽沉掉  后来发现血浆特别不稳定,想着直接采完全血沉淀掉     我觉得用乙腈应该也一样,因为全血被酸化了,成团了  
现在有一个想法是加盐有可能将胶状物破坏,沉淀可能好一些,还没有试  
谢谢你的解答,我有时间试一试

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4楼2018-12-03 22:42:54
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多肽药物我之前做过,由于多肽结构亲水性强,采用液液萃取回收率极低,最好的方法是用固相萃取柱纯化,样品上柱后先采用低浓度甲醇(60-80%)清洗蛋白,然后采用加甲酸(0.05-0.1%左右)的纯甲醇洗脱药物,回收率可达95%以上。

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5楼2018-12-05 01:44:15
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a皑雪c

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5楼: Originally posted by liuzhaomin at 2018-12-05 01:44:15
多肽药物我之前做过,由于多肽结构亲水性强,采用液液萃取回收率极低,最好的方法是用固相萃取柱纯化,样品上柱后先采用低浓度甲醇(60-80%)清洗蛋白,然后采用加甲酸(0.05-0.1%左右)的纯甲醇洗脱药物,回收率可 ...

你用的是HLB的还是离子交换柱的一种  全血可以SPE吗

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6楼2018-12-05 13:35:16
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)


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6楼: Originally posted by a皑雪c at 2018-12-05 13:35:16
你用的是HLB的还是离子交换柱的一种  全血可以SPE吗
...

用的是waters的Oasis HLB柱。我当时用的血浆,全血应该也可以,你可以试试。其实分离血浆也不难,只需要采血时候往血里加抗凝剂,再离心就行。

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7楼2018-12-05 13:50:41
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a皑雪c

银虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by liuzhaomin at 2018-12-05 13:50:41
用的是waters的Oasis HLB柱。我当时用的血浆,全血应该也可以,你可以试试。其实分离血浆也不难,只需要采血时候往血里加抗凝剂,再离心就行。...

你好,我现在在做另一个多肽,分子量2900多,含有26个氨基酸,其中六个赖氨酸,一个组氨酸,它是强碱性的还是弱碱性的呢   用固相萃取的话是WCX还是MCX呢,我试了HLB MCX WCX都不行    你当时做的多肽酸碱性了解吗,HLB第一部你加酸或者碱稀释再上样还是直接上样

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8楼2019-11-24 21:25:25
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)


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8楼: Originally posted by a皑雪c at 2019-11-24 21:25:25
你好,我现在在做另一个多肽,分子量2900多,含有26个氨基酸,其中六个赖氨酸,一个组氨酸,它是强碱性的还是弱碱性的呢   用固相萃取的话是WCX还是MCX呢,我试了HLB MCX WCX都不行    你当时做的多肽酸碱性了解吗 ...

我当时采用的是HLB柱,测的是10肽,第一步活化柱子用的是甲醇,然后上样,低浓度甲醇水淋洗,最后洗脱用的是含甲酸的纯甲醇。你说试了HLB MCX WCX都不行,具体是什么操作步骤,能说一下么?
9楼2019-12-09 13:32:35
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