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Korea??

新虫 (正式写手)

[求助] 最近小提质粒的浓度都很低,酶切回收后基本就没有了 已有1人参与

不知道是什么原因,实验室在大肠杆菌中保存的T载体质粒,提取后浓度都很低。酶切纯化回收电泳基本没条带了。平板也划了,连续继带了几次后,小提质粒还行,但到酶切纯化回收这一步,浓度加到最大也是基本没有条带。质粒失效还是丢失了呢?

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1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
限于提质粒这一步正常的话,建议分析几个原因:
1.是否酶切的问题,酶切完可以选择跑胶试下,另外酶切时间和温度是否合适
2.酶切后是否马上开始纯化回收?
3.检查纯化回收试剂盒是否失效,或者试剂用错,只要有质粒,且酶切后也存在,是不会一点也没有的
4.酶切完可以用切胶回收尝试一下
2楼2018-11-28 16:06:50
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Korea??

新虫 (正式写手)

一般酶切结束就立马纯化胶回收,回收率很低,连接转化效果很差

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3楼2018-11-28 19:22:51
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想要读博

铜虫 (正式写手)

原因很多,先看自己操作有没有问题,不是自己再做一遍,找个人同样步骤同样环境再做一遍,如果别人能做出来,那就是你的问题,如果都没有,就考虑载体是不是保存不当,不能用了,借其他实验室能坐出来去连接,还有考虑酶,酶有没有保存不当,失火了,还有是不是你的氨苄不行了,因为这个问题前段时间我们也出现,不要先去找老师,老师可能不帮你,帮了也会批评你。该做的都做了,还没结果,再去找老师,我们那次的问题是新换的同厂家的高效酶有问题,退货用普通酶可以做出来。

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你若盛开,清风自来
4楼2018-11-28 19:42:56
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


5楼2018-12-13 22:20:02
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