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秋犯

银虫 (正式写手)

[求助] 求助-土壤微生物的获取及确定其生长曲线 已有1人参与

实验需要从土壤中提取微生物,做生长曲线确定达到对数生长期的时间。
但是,目前培养的微生物几乎不长,OD值很小,没有理想的实验结果。
第一次做微生物实验,很多地方不懂,以下是实验过程,请大家看一下有没有错误的。

20g土壤+100ml纯水震荡一晚上,取悬浊液标记为10^-1
稀释至10^-2、10^-3、10^-4
取以上不同梯度的菌液5ml ,加到100ml培养基中(培养基主要成分为葡萄糖、蛋白胨少量,以及一些无机元素)
在37℃,60rpm震荡培养,每隔1h拿出来OD600。

目前做过两次实验,OD值一直在0.005-0.011,还有负值。
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赵统超

木虫 (正式写手)

竟然有负值,我觉得可能是你紫外操作有问题,而且培养时间短现象不明显。

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2楼2018-11-27 11:59:53
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秋犯

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵统超 at 2018-11-27 11:59:53
竟然有负值,我觉得可能是你紫外操作有问题,而且培养时间短现象不明显。

分光光度计操作应该没问题,上次做了这几个时间点
0h    2h    3.5h     6h    20h
0.05  0.057  0.105  0.023  0.017
-0.009 0.007 0.009 0.006 0.005
之前用的一台新的分光光度计,吸光度一直跳,较不到零点,后来换老的还好点。
怀疑没从土壤里面提取到微生物,或者培养基不合适

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3楼2018-11-27 12:10:33
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赵统超

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋犯 at 2018-11-27 12:10:33
分光光度计操作应该没问题,上次做了这几个时间点
0h    2h    3.5h     6h    20h
0.05  0.057  0.105  0.023  0.017
-0.009 0.007 0.009 0.006 0.005
之前用的一台新的分光光度计,吸光度一直跳,较不到零点,后 ...

你提取的微生物是需氧还是厌氧

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4楼2018-11-27 12:57:09
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秋犯

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 赵统超 at 2018-11-27 12:57:09
你提取的微生物是需氧还是厌氧
...

不太懂,应该是都有的。我震荡培养的时候三角瓶是加棉塞的,有影响吗

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5楼2018-11-27 14:44:47
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y214575

金虫 (小有名气)

生物工程师

土层深度是多少?可以先在平板上培养土粒,看看都有那些菌建议增长培养时间

发自小木虫Android客户端
6楼2018-11-29 15:59:28
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秋犯

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by y214575 at 2018-11-29 15:59:28
土层深度是多少?可以先在平板上培养土粒,看看都有那些菌建议增长培养时间

15cm附近,不是很精确的采的。我的培养基灭完菌后有颜色,对od600的测定有影响吗,还有看网上说看到一般是用od600,这个波长一定合适吗。

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7楼2018-11-29 17:14:37
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y214575

金虫 (小有名气)

生物工程师

引用回帖:
7楼: Originally posted by 秋犯 at 2018-11-29 17:14:37
15cm附近,不是很精确的采的。我的培养基灭完菌后有颜色,对od600的测定有影响吗,还有看网上说看到一般是用od600,这个波长一定合适吗。
...

有点颜色没关系,当你养起来时候很明显是浑浊的,肉眼可分的,先看能不能长在分离纯培养测曲线。

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8楼2018-12-01 14:58:35
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祁彻彻

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小冀-: 金币+2, 鼓励回帖,有帮助 2018-12-05 11:04:10
建议先在固体培养基上分区划线培养,再接种到液体培养基中,反复几次后,活性就变得比较好了
9楼2018-12-05 09:01:46
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