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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » microRNA分析问题
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panda-盼

新虫 (著名写手)

[求助] microRNA分析问题 已有1人参与

要定量microRNA，先RT再qPCR，用的是TaqMan的试剂，请问大家RT的时候内参U6和我的特异性RT引物要加在一个体系里的意思吗，还是分开两个体系加？第一次做不清楚，说明书上也没有。谢谢，万分感谢@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan
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1楼 2018-11-24 17:41:11
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panda-盼

新虫 (著名写手)
看到一个帖子说加到一个体系里，我表示很方

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2楼2018-11-24 17:51:31
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panda-盼

新虫 (著名写手)
帖子说内参U6的引物和特异性RT引物放在一个体系里

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3楼2018-11-24 17:55:32
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-11-25 09:14:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by panda-盼 at 2018-11-24 17:55:32
帖子说内参U6的引物和特异性RT引物放在一个体系里

特异性茎环引物反转做mirna定量pcr，u6和目的的mirna一体做rt，再做qpcr，不然做标准化没有意义。如果要检测a、b，c三种mirna，可以分别用a、b、c与u6反转，这样比较准确。用多对引物做反转很正常的。

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2019更好更棒!
4楼2018-11-24 22:01:44
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panda-盼

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by GRUBBY_WU at 2018-11-24 22:01:44
特异性茎环引物反转做mirna定量pcr，u6和目的的mirna一体做rt，再做qpcr，不然做标准化没有意义。如果要检测a、b，c三种mirna，可以分别用a、b、c与u6反转，这样比较准确。用多对引物做反转很正常的。
...

您的意思是我如果检测a、b、c三种micro，RT的时候有7个体系，分别是a+U6，b+U6，c+U6，a,b,c,U6,还是说只要a+U6，b+U6，c+U6 3个体系就可以了，我又查了一下看有的加在一起，有的不加在一起。
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5楼2018-11-24 22:31:21
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by panda-盼 at 2018-11-24 22:31:21
您的意思是我如果检测a、b、c三种micro，RT的时候有7个体系，分别是a+U6，b+U6，c+U6，a,b,c,U6,还是说只要a+U6，b+U6，c+U6 3个体系就可以了，我又查了一下看有的加在一起，有的不加在一起。...

后一种

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2019更好更棒!
6楼2018-11-25 08:31:15
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木槿盼盼

新虫 (小有名气)
按照上面的战友的回答，如果U6和miR一起反转录，就需要在同一个管里加U6的反转录引物(即oligodT)和miR的特异性茎环引物，是这样吗？

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7楼2018-12-17 18:08:42
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panda-盼

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 木槿盼盼 at 2018-12-17 18:08:42
按照上面的战友的回答，如果U6和miR一起反转录，就需要在同一个管里加U6的反转录引物(即oligodT)和miR的特异性茎环引物，是这样吗？

我最后还是分开加的

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8楼2018-12-18 08:31:35
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木槿盼盼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by panda-盼 at 2018-12-18 08:31:35
我最后还是分开加的
...

我这几天在做这个实验，之前也是分开加的，但是感觉有点浪费试剂   多多交流哟！

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9楼2018-12-18 20:25:49
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